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标题:【求助】iTRAQ数据分析问题

queen[使用道具]
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【求助】iTRAQ数据分析问题


做了一次iTRAQ,得到了大量的蛋白,请问差异蛋白的界定有没有一个公认的标准呢?我看文献中标准都不相同。望赐教。
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dongdongqiang[使用道具]
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差异蛋白的选择一般是没有很明确的规定的,根据自己样品的差异大小和所使用的鉴定技术来规定的,常用的是P值小于0.05,差异倍数是大于2倍(或是1.5倍)和小于0.5倍的蛋白作为差异蛋白,iTRAQ置信区间95%以上。
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queen[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 dongdongqiang 于 2013-4-11 15:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

差异蛋白的选择一般是没有很明确的规定的,根据自己样品的差异大小和所使用的鉴定技术来规定的,常用的是P值小于0.05,差异倍数是大于2倍(或是1.5倍)和小于0.5倍的蛋白作为差异蛋白,iTRAQ置信区间95%以上。 ...

谢谢,我选取的是1.2倍,不知道可以不?
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QUOTE:
原帖由 queen 于 2013-4-11 15:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



谢谢,我选取的是1.2倍,不知道可以不?

iTRAQ由于动态范围差、2级信号抑制等问题,所以差异一向会偏小,所以用1.2也是挺常见的
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is2011[使用道具]
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很多文献有点差别的。大的2.0也有 小的1.2也有
我也做定量。
我先自己用仪器和流程 做了一个1:1的样本。即一个样本平均分两份。标记后,做一个正态分布图。用均值加减1.96SD算出来 95%可信区间大概在0.7-1.5. 那么就是说明,理论上1:1的样品,结果95%在0.7-1.5浮动。那么就选择这个值意外的作为有差异的蛋白质。感觉这个比较严谨和有说服力些。
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mamamiya[使用道具]
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很多文献有点差别的。大的2.0也有 小的1.2也有
我也做定量。
我先自己用仪器和流程 做了一个1:1的样本。即一个样本平均分两份。标记后,做一个正态分布图。用均值加减1.96SD算出来 95%可信区间大概在0.7-1.5. 那么就是说明,理论上1:1的样品,结果95%在0.7-1.5浮动。那么就选择这个值意外的作为有差异的蛋白质。感觉这个比较严谨和有说服力些。

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那我觉得是不是还要做个1:1.5的混合样本出来看看在itraq里变成什么范围了,然后这个以外的才算呢
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xyw5[使用道具]
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iTRAQ差异蛋白的选择标准有很多,根据我们的经验和对文献的整理,可以把相关问题细分如下:
1,可靠蛋白的选择标准:首先须判断你选择哪些蛋白来进行差异分析,涉及的标准按照严格程度不同,大致有四种,分别是蛋白95%可靠性,蛋白99%可靠性,蛋白有一条及以上95%以上可靠性的肽段、蛋白有2条及以上95%以上可靠性的肽段。
2,在以上基础之上,同时结合是否有重复数据,进行差异蛋白的选择,主要的标准有以下几类,变化倍数正负1.2倍以上,变化倍数正负1.5倍以上(比较常用),变化倍数正负2倍以上,T测验显著差异(p小于0.05)、T测验极显著差异(p小于0.01)、T测验显著差异(p小于0.05)且变化倍数1.5倍以上
3,以上只是列出并归纳了部分标准,有些文献可能还会采用其它标准,但基本上都是这些类别的衍生,
4,我专门找了两篇有代表性的iTRAQ论文(近两年在MCP杂志上发表的,应该具有一定说服力),你们可以在ppt中看看,也可以自己去下载了解,是免费的,
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queen[使用道具]
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还想问下,如果我是用血清做的iTRAQ,找到某蛋白为可能差异蛋白。我看文献都是用Western blot来验证,请问,可以用ELISA么?
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xyw5[使用道具]
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可以的,你看我给写的ppt里面有一篇寻找血清疾病标志物的文章,也是用iTRAQ技术做的,发表在MCP杂志上,就是用了ELISA技术
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阿凡提[使用道具]
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这个一般没有固定的,需要你后期做T检验和其它一些生物学信息分析,取决于你的数据质量,如果取1.2倍后P<0.05,证明你的数据质量很高,依然可用,并且会得到一些很有价值的差异表达信息
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