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标题:[未解决]斑马鱼测定雌激素干扰试验：暴露化合物浓度的确

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
kaixinjiuhao[使用道具]
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发表于 2013-4-11 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

斑马鱼测定雌激素干扰试验：暴露化合物浓度的确

最近刚接触内分泌干扰实验，打算用斑马鱼作为受试生物，看到暴露化合物浓度很低，但是又不知道选取的标准，不知哪位大侠肯不吝赐教，小妹在此深表感谢~~~~
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XXXX111[使用道具]
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发表于 2013-4-11 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没什么特别的标准
先看化合物理化性质确定暴露实验最高浓度也就是溶解度 很多暴露实验直接用溶解度浓度作为暴露浓度
然后看你试验目的
如果针对环境内分泌干扰物的效应 可通过文献调研看水体中浓度范围如何来设定 然后讨论该浓度下影响
如果深入研究效应机制 预实验浓度范围可多跨几个数量级 找到EC50 然后根据最低效应浓度设计实验 至于效应是什么找找文献中相关endpoint 最好是直接就可以看到的 再往下就看你关注什么了 例如干扰激素合成 干扰激素结合受体 干扰激素代谢过程…… 参考相关研究关心的指标即可 这些也适用于环境浓度的研究
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甜甜TVT[使用道具]
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发表于 2013-4-11 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先 严格意义上没有不致死浓度这一说 毒性测试里面用最大耐受剂量（MTD）来表明进行慢性毒性测试的剂量 你可以参考EPA的定义来确定
其次 既然是筛选 建议采用环境浓度与MTD浓度 可适当用梯度浓度考查毒物兴奋效应 否则会被审稿人质疑研究意义 当然看你要投期刊的档次而定 你也可以回避这个问题 直接说我用的浓度是X 且最好你考察的是多种化合物 否则就一种也谈不上筛选 其余的看运气
再次 既然手头有化合物结构 先找个QSAR工具先预测下毒性 省得做无用功

总之 明确研究目的 用梯度浓度筛选逻辑上有问题 任何化合物高浓度都可能会有效应 梯度浓度是用来说明效应变化而不是有没有效应 一个是毒性机制研究一个是风险评价 不一样的思路
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读过书的[使用道具]
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发表于 2013-4-11 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有效应跟致死不是一回事 看你关心哪个过程
不致死浓度就一个 怎么选低浓度？
你既然研究雌激素效应 起码对相应的效应终点有一定的了解 根据效应定浓度是基本原则 必然要有预实验确定浓度 拿出效应曲线或引用文献效应曲线来说明 要是终点不明确就用不致死浓度 文章中说明这个浓度是为了观察到效应
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小书虫[使用道具]
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发表于 2013-4-11 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很不错了 早些问出来要比什么都不问乱做实验强很多 等你开始写文章就有体会了 或者说 你每做一个实验都考虑下文章中怎么描述 有没有地方可以被质疑 别人如何解决这个问题 ……
慢慢来 别着急 多看文献 多总结 多思考
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发表于 2013-4-11 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
肯定是参考前人做的浓度范围
最有效的是你实际做下，举例预实验选几何级数浓度1,0.1,0.01,0.001,0.0001,0.00001...mol/L
总能把选择终点下的浓度-响应范围找出来
你再细化浓度测定就行了
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美丽婷婷[使用道具]
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发表于 2013-4-11 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
通过效应来确定浓度 这需要你的浓度设置多跨几个数量级 更关键的就是你的效应终点
举个例子 我手上有一株转有报告基因质粒的细胞 对雌激素类物质敏感 存在化学发光 那么我就设定个浓度梯度把待测物质暴露给这株细胞 酶标仪定量化学发光 对暴露剂量做浓度效应曲线 找到EC50 这个数值就可以作为下一步探讨机制时确定浓度的参考
所以你要做筛选 多找几个endpoint 必要时自己合成biomarker或转导相关报告基因来实现 生物芯片 qsar都可以上 从不同角度筛查 加上初步机制讨论发文章就够了
只了解IC50的话能把细胞毒性说清楚也可以 跟导师讨论下 斑马鱼的卵黄蛋白原就是不错的endpoint 形态学上就可以区分 很经典了 不过出不了太上档次的文章
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grace![使用道具]
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发表于 2013-4-11 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
卵黄蛋白原是有试剂盒可以测的
形态学上可区分的是对胚胎发育过程的影响 昨天刚听了个报告是用鱼的胚胎在96孔板上做的 也是高通量筛选
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