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我们实验室没有蛋白纯化仪，所以没法做这些。之前做的那次，因为不知该用什么平衡液，就用了最开始的1×Ni-NTA 结合缓冲液，也没有用20%的乙醇水溶液进行处理，不知会不会对柱子有损害？
另外，我用这个柱子纯化时，开始纯化的超声后的上清，用的咪唑浓度是10mM、20mM、250mM来纯化的，最后分四次洗脱，可是除了最后一次洗脱物中有蛋白之外，其他的都没有，而且杂带白也是在最后一步与目的蛋白一起洗脱下来的。整个结果与没纯化之前没太大变化。后来纯化的包涵体用的咪唑浓度是20mM,40mM,100mM,250mM，包涵体也是在最后一次才洗脱下来，而且情况跟前面那次差不多，还是很多杂带，而且在穿过峰中也有明显的目的带，请帮忙分析一下，该怎样优化条件比较合适？另外我见有人在纯化的同时进行复性，就做了一次，用的尿素浓度为6M、5M、4M、3M、2M、1M、0M，结果洗脱液中没有任何蛋白。 而是最后用变性缓冲液把蛋白洗下来了，但有很多杂带。
