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标题:[未解决]毛细管电泳重复行问题

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
yuyan0419[使用道具]
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发表于 2009-11-18 09:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

毛细管电泳重复行问题

分离蛋白样品，用的裸管，磷酸缓冲液PH值2.5，重复性非常不稳定，每天连续进样时出峰时间一直前移，每次进样用氢氧化钠冲洗2min。请大家帮帮忙，急！谢谢！
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eedc-dcnge[使用道具]
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发表于 2009-11-18 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼书用的什么仪器，看上去貌似电泳，气相还用到缓冲溶液了么？
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  • j-1982   2009-11-22 23:05  可用分  +3   感谢参与讨论。
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yuyan0419[使用道具]
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发表于 2009-11-18 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 eedc-dcnge 的帖子

我用用的是毛细管电泳啊
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thereyoube[使用道具]
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发表于 2009-11-18 19:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
只用氢氧化钠冲洗完就完事了？用氢氧化钠最好再用水，然后再用缓冲溶液！重现性不好，不知道你主子处理的怎么样！还有就是缓冲溶液的pH2.5也是电渗流的拐点！这个也应该考虑一下！
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yuyan0419[使用道具]
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发表于 2009-11-18 20:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #4 thereyoube 的帖子

氢氧化钠2min,水2min，然后再用缓冲溶液5-20min,出峰时间整体前移，每次较上次前移0.2-0.5min左右，期间也会有重复性较好的两针，但是整体就是前移的，一直找不到原因~~请指教。
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thereyoube[使用道具]
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发表于 2009-11-20 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
出峰时间不稳定是因为磷酸根与管壁未平衡，建议用0。1的氢氧化钠冲2-3分钟后直接用磷酸缓冲冲洗5分钟看是否有好转，并且每天做完实验后最后一步用缓冲充满柱子，并把柱子两端浸在缓冲液瓶子里。
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发表于 2009-11-20 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果楼主是pH计调的pH值吧.建议不要用pH计调,直接算出来缓冲液的配比体积,每次都这样加试试.
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  • j-1982   2009-11-22 23:08  专家分  +1   最好解释一下原因，为什么用计算值？ ...
  • j-1982   2009-11-22 23:08  可用分  +3   最好解释一下原因，为什么用计算值？ ...
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iTIANMING[使用道具]
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发表于 2009-11-20 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用pH计调pH值的话,建议是计算出所需pH缓冲液的体积配比,然后每次都按照此配比加试试.
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  • j-1982   2009-11-22 23:09  可用分  +1   感谢参与问题讨论。
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sseia42[使用道具]
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发表于 2009-12-17 14:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
若每次进样间隙都用碱冲的话，建议碱冲完后，缓冲冲段时间，再进行次“预电泳”（不进样，空走基线），然后再进样分离。

每次碱冲后，这个内壁平衡是不同的！

再问，您的碱液的浓度是多少？
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yuyan0419[使用道具]
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发表于 2009-12-18 19:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #9 sseia42 的帖子

0.1MNaOH,请问预电泳作用是什么啊？每次进样都要预电泳么？多长时间呢，谢谢！

[ 本帖最后由 yuyan0419 于 2009-12-18 19:18 编辑 ]
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