小中大【讨论帖】Tricine SDS-PAGE凝胶配方（16.5％）
这篇配方是我原发在这儿的cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/3193927')怕帖子沉了，搜索了一下就开了一个新主题。另有Tricine SDS-PAGE凝胶配方（10％）的配方，有战友需要话我再发出来 。希望用了这个配方的战友如果效果好的话请跟贴说明，效果不好的话，我尽可能帮助战友们分析一下问题，反正这是我实践过的东西，不应该跑步出来的呀^_^另外Tricine SDS-PAGE16.5％是我见过最浓的Tricine SDS-PAGE的胶了，真没听说过20％Tricine SDS-PAGE胶，如果谁有说一下效果怎么样，是否能分离到几百，甚至几十分子量的肽？16.5％Tricine SDS-PAGE胶的分辨率要比20％SDS-PAGE胶效果好，原因就在Tricine多了2个羟基，增加了与多肽的结合能力，这样在染色和脱色的时候多肽能牢固的结合在胶上，而不易被洗脱下来。
真是抱歉，到今天为止我才学会怎么看我以前留过言得帖子，配方我这有，是根据一篇外文译出来的，原文不知道放哪去了，这个配方对分离分子量10 000到1000的多肽类效果非常好，由于我得图谱需要写论文暂时不能上传参考图，反正好不好用大家试试就知道了，迟到了半年对不起於敏 战友，也许於敏 战友是用不上了，但后来的战友也许能用上，我也欣慰啦^_^
一、Tricine SDS-PAGE药品配方如下（针对分离分子量范围在10kd－1kd的肽类）我使用的是PALL的去离子水，药品均为amersham公司的：
1.正极电泳缓冲液（1x）：
12.19gTris 先溶于400ml双蒸水1mol/L的HCL调至PH8.9，再定容至500ml。
2.负极电泳缓冲液（1x）：
6.055g Tris ，8.958g Tricine（三羟甲基甘氨酸），5.0g SDS ，将这三种药品溶于400ml双蒸水中，1mol/L的HCL滴定到PH8.45（这步大家注意了，我实际试验操作发现没调PH值前，PH值实际为8.35，因此用的是NaOH，老外的文章也不可信哦），在加水定容到500ml。
3.丙稀酰胺母液（49.5％T，6％C)
Acrylamide 23.5g ， bis 1.5g 加50ml水
4.凝胶缓冲液液（3X）：
18.15g Tris，0.15gSDS，溶于40ml水中，用1mol/L的HCL滴定至PH8.45再加水至50ml。
以上溶液均需millipore膜过滤。（millipore膜过滤，具体用多大规格的老外没说，我开始用的是0.25ul的，在后来重新配制的也都没过滤（忘了），感觉效果差不多，请战友自己在试验中感觉吧^_^）
5.100％甘油
6.样品缓冲液
1ml甘油（100％），0.5ml巯基乙醇，1ml 0.5mol/L Tris-HCL（PH6.8，6.05gTris-HCL溶于100ml水中），溴芬兰痕量（0.005％～0.02％），加水至5ml水中，分装成1ml大小，－20摄氏度保存。
二、Tricine SDS-PAGE凝胶配方（16.5％）：
30ml体系（小板胶10ml到15ml即可，spacer为0.5mm－0.75mm）：
丙稀酰胺母液 （49.5％T，6％C) 10ml
凝胶缓冲液液（3X） 10ml
100％甘油 3.1ml
去离子水 6.9ml
以上溶液脱气10－15min（据我试验比较，不抽气和抽气好像差别不大，但对试验要求严格的战友还是最好做这步，个人经验，仅供参考）
10％AP（过硫酸胺） 100ul（新鲜配置，4度保存至多一个月）
TEMED 20ul
以上溶液最好都在4度保存
三、电泳参数：以10cmX12cm的小板胶为例，恒流20mA，电压在100v－200v之间，我选择120v，20mA。
四、固定液：冰乙酸：甲醇：水＝50：100：350 固定40min
染色液：冰乙酸：甲醇：水＝225：225：50 考马斯亮兰1.25g/L 染色1h
脱色液：冰乙酸：甲醇：水＝50：225：225 脱色30min后观察着，直到你满意效果为止
