转载：利用Wyatt激光光散射仪表征高分子分子量及分布

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发表于 2009-11-23 13:49 资料个人空间短消息加为好友

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　利用Wyatt激光光散射仪表征高分子分子量及分布中的几点心得

近期，实验室买了套美国怀雅特技术公司的多角度激光光散射仪。刚开始安装完后，挺会用的，后来丢了段时间全忘光了。

　　在自己做样品的时候遇到了很多麻烦，尤其是里面的几个参数，都不知道到底是干什么用的。反正是一塌糊涂。

　　后来跟wyatt的工程师互通几次email，觉得其实仪器还是蛮好用的，功能也挺强大。现分享经验如下：

　　1关于HELEOS十八角激光光散射仪

　　首先是zimm图，首先将样品配制成一系列浓度(至少5个浓度梯度)，依次注入到检测器中，根据浓度，角度的拟合，

　　得到重均分子量(平均值)，均方根旋转半径，以及第二维利系数(软件中的help文件告诉你如何得到分子量和半径，

　　好像是Globe Fitting技术)。

　　在这个试验中，有几个地方不容易处理好：

　　浓度如何配准：用容量瓶定容，然后再用重量法稀释配制不同浓度梯度的溶液;或者全部用容量瓶定容;

　　梯度如何选择：以1或0.5为稀释单位就可以。

　　手动进样费力：利用注射泵或液相泵进样。

　　归一化：因为归一化的操作与溶剂有关，因此，只要是跟换溶剂了就必须重新做归一化(这个上面我犯了好几次错误，呵呵)。

　　做完后就可以保存为模板了，以后在这种条件下，直接打开就可以了。

　　另外，还有个debye模式，该模式下，能对每一个浓度都能测得其分子量和半径。我在文献中面看到有人将不同聚合反应时间

　　的聚合产物经过纯化后，测分子量对浓度作图，得到反应动力学方程。

　　其实，利用wyatt的软件还可以将两种模式中任何一种模式的数据应用到另一种模式下。但不知道怎么弄，希望高手们指点下子，现谢谢啦!

　　2.关于Optilab rEX示差检测器

　　据wyatt工程师说，这个示差检测器是专门为光散射仪生产的，因为在利用光散射测分子量的时候需要输入dndc值，具体的测定

　　方法和HELEOS测zimm图是一样的。

　　那么dndc值到底作用是什么呢?dndc值又称为折射率增量，高分子的分子量与该值的倒数平方成正比;另外，示差检测器在测定

　　物质浓度的时候也需要该值，样品的测定浓度与dndc值成反比。因此dndc值的准确性直接影响分子量及浓度的准确性。而且该检

　　测器实际上也是浓度型检测器，能与普通HPLC联用，测定物质的浓度。我还用它测定了多糖的含量，也是先做标准曲线那种。

　　3 HELEOS十八角激光光散射仪，Optilab rEX示差检测器，GPC/SEC联用

　　个人觉得该检测器联用，能实现功能最大化，也很方便，就像HPLC一样。联机的话能测定大分子的分子量(Mw，Mn，Mz，Mp)，

　　均方根旋转半径半径(Rw，Rn，Rz)，分子量分布，多分散性，高分子在溶液中的聚集态等信息。

　　对菜鸟可能遇到分子量测不准的情况，遇到这种情况可以按照下面几种办法解决：

　　检查仪器常数是否正确，默认值为1.0e-4;

　　dndc值是否正确，默认值有可能是0.185哦;

　　归一化是否做了，一般没做归一化，结果报告中数据后面的误差较大。

　　最后就是看柱子的分子效果，要是样品中含有的物质较多，且峰又拖尾的话，数据一般偏大，这个大家可以中debye的切片图

　　里边的小滑块看出来。

　　如何定峰：定峰的三原则：第一条，激光和示差都有信号;第二条，峰的起始点和结束点为基线高度的三倍;第三，遇到没有

　　完全分离开的峰，可以单独分开定。

　　数据基本分析：GPC/SEC分离大分子的原理是大分子先洗脱出来，小分子的后洗脱出来;反映到激光信号上面就是这样子，峰曲

　　线从左到右分子量依次减小，激光对大分子信号高;而示差检测器只对折射率有反应，信号高，则对应物质浓度就高。这样子就

　　可以了解到高分子中不同组分的信息。

　　定峰的三原则：第一条，激光和示差都有信号;第二条，峰的起始点和结束点为基线高度的三倍;第三，遇到没有完全分离开的峰，可以单独分开定。

　　数据基本分析：GPC/SEC分离大分子的原理是大分子先洗脱出来，小分子的后洗脱出来;反映到激光信号上面就是这样子，峰曲线从左到右分子量依次减小，激光对大分子信号高;而示差检测器只对折射率有反应，信号高，则对应物质浓度就高。这样子就可以了解到高分子中不同组分的信息。

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