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要验证阴性对照中的带是不是由于培养基中的微量lactose的,可以做如下实验,
A. 测培养基中乳糖含量;
B. 购买无乳糖培养基;
但是我不愿浪费时间在这上面。。。卖个关子哈
实际上,我做了如下的一组处理:
a. 阴性对照+2%glucose
b. 阴性对照 without glucose
c. 诱导2 h
d. 诱导3 h
这个处理其实存在设计上的错误。如果要得出严谨的结论,应该要加一个2%glucose的诱导处理。这样,预期的结果就是:
a, 无目的条带,
b, 有目的条带,但不够多,
c, 有
d, 有
e, 2%glucose, 诱导,无目的条带或者仅有很浅的带。
很抱歉,e没有做。那天很久没用的两瓶glucose中的一瓶被污染了。。。
结果见附图。
图注的大概意思:
从左到右的泳道都是按a, b, c, d处理排列的。5-8以及13-16泳道是positive expression control。是pET15b携带b-galactosidase的一个构建。泳道1-8是全细胞蛋白电泳;泳道9-12是取沉淀电泳;13-16是上清电泳。结果:
a. 有glucose的阴性对照无带(或非常浅)
b. 无glucose的阴性对照有带,但整体来说比诱导的弱
c. 诱导的有带
d. 蛋白大小还是不对(其实是对的,我冤枉它了,请看后面的帖子)。
结论:培养基中确实很可能存在lactose。而且应该是造成阴性对照有表达的原因。