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标题:色谱经验集锦

thereyoube[使用道具]
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发表于 2009-12-2 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

色谱经验集锦

一.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?

　　原因可能有：

　　1泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理;

　　2比例阀失效，更换比例阀即可。

　　3泵密封垫损坏，更换密封垫即可。

　　4溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法;

　　5系统检漏，找出漏点，密封即可。

　　6梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

　　二.请问HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法"
    1样品量不足：解决办法为增加样品量

　　2样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子



　　3样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器

　　4检测器衰减太多：调整衰减即可。

　　5检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数

　　6检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。

　　7检测池中有气泡：解决办法为排气。

　　8记录仪测压范围不当：调整电压范围即可。

　　9流动相流量不合适：调整流速即可。

　　10检测器与记录仪超出校正曲线：解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

　　三.液相色谱仪色谱柱使用及维护

　　每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!------ 一定得做!

　　新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。

　　卡套柱的安装(不加预柱)

　　1.将卡套架套入柱芯

　　2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套(见下图)

　　3.将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

　　4.将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

　　5.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

　　6.连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手

　　注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。

　　卡套柱的安装(加预柱)

　　1.将卡套架套入柱芯

　　2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯(见下图)

　　3.将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

　　4.将"子弹头"预柱放入卡套片内

　　5.将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

　　6.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

　　平衡色谱柱　反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。

　　硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡

　　如何平衡色谱柱?

　　平衡过程中，将流速缓慢地提高

　　用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡)

　　色谱柱的再生 　　进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。

　　表1　建议用来冲洗的溶剂体积

　　注意：

　　在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

　　**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

　　色谱柱的维护

　　1.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)

　　2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围

　　3.避免流动相组成及极性的剧烈变化

　　4.流动相使用前必须经脱气和过滤处理

　　5.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中

　　6.压力升高是需要更换预柱的信号





[ 本帖最后由 thereyoube 于 2009-12-2 15:17 编辑 ]
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发表于 2009-12-2 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
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thereyoube[使用道具]
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发表于 2009-12-2 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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发表于 2009-12-2 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很想全都看完！！
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发表于 2009-12-2 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
学习一下，谢谢了。。
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发表于 2009-12-2 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢！很全面的资料！！
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发表于 2009-12-2 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好文章，感谢楼主共享！！
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ztj970831[使用道具]
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发表于 2009-12-2 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
精品，值得好好看下。
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发表于 2009-12-2 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
真的很感谢，对我很有用~~
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发表于 2009-12-3 09:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好资料,
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