小中大【分享】提高HPLC检测限、溶剂脱气等的几点经验
本文仅针对用反相碳十八烷基硅烷化填料的柱子和紫外检测器的HPLC。
通常在理论教学时，HPLC分析总要求实用HPLC纯的试剂、用孔径比填料粒度小的微孔滤膜过滤流动相、最好用真空或氦气脱气。实际上，按照不同的精确度，有时候并不需要做得那么严格。里首先申明，虽然许多做法是我的经验，但请读到这篇文章的朋友自己做判断，如果按我说的做，造成任何损失，我深表遗憾，但我不承担任何责任。这篇文章仅供交流和讨论。
关于HPLC纯。我想这里关键是两点：纯度高、紫外吸收小。纯度高一方面，没有杂质干扰测定;另一方面不会有金属离子损害纯度为99.99%以上的高纯度硅胶基质。但如果你的HPLC分析的是直接用分析纯试剂制备而没有其他色谱纯溶剂稀释步骤而且是中药之类的dirty sample(脏样品);那么用自己重蒸的分析纯溶剂也可以了，当然还有一点是紫外吸收也要同时符合要求。这对于黄芩苷一类含量高、紫外吸收大的样品足够了。如果懒得自己重蒸，也可以用些便宜的色谱纯试剂。事实上，据我所知，许多所谓的色谱纯也是国内制备灌国外品牌的瓶子卖的。水嘛，用去离子水就行了，也就是市售的纯水。水的紫外吸收与甲醇、乙腈相比，小得很，主要考虑不要有金属离子和细菌。不过，千万别买了假的纯水。保险做法，找家大的纯水供应点，买水回来，做一下紫外扫描、做下菌检、再来个水硬度检查，行的话就固定用他的。
滤膜过滤，除非是无机盐，否则我均不过滤，定期把前置的过滤头取下，放稀硝酸里清洗，再用纯水洗至中性就行了。能过过滤头的东西就让它过吧，懒得理它，有人可能会考虑堵塞的问题，没等它堵，我的柱子都会坏了，把柱子前面一点挖了，添上新的，就行了，当然这里操作要小心。至于长菌，能在甲醇里长，我也没办法了。
如果是高压二元梯度泵，用超声脱气就行了。把溶剂瓶放到59kz的超声清洗机超至没有白白的气泡上来就行了。四元的是混合后脱气，比较重要，一般都会配脱气机，我也没用过，不说了。如果是要求检测限很小的分析，有几点建议，首先，如果是等度洗脱，一定要改成单元等度，即流动相混合到一个瓶子里;第二，尽量用乙腈/水系统洗脱，乙腈紫外吸收小，相同条件下，噪音小很多;在前两样都解决不了，那只好通氦脱气了。梯度洗脱，如果像人参皂苷之类的，尽量用乙腈/水系统洗脱，不行就通氦啰。
做了那么久液相，堵塞流路的事情碰过几回，都是无机盐配的缓冲液惹祸，都不关过滤的事。缓冲液换有机相冲柱时，有人一不注意没冲干净无机盐就冲甲醇，结果就塞了。千万要用90%左右的水先冲干净盐。不锈钢管路堵了好办，烘箱烘之，再冲开。柱子堵了，我还没试过。
其实，做HPLC通常担心的是做不出理想的结果和坏柱子。
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