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标题:【讨论帖】蛋白芯片技术答疑帖

dragonkilly[使用道具]
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【讨论帖】蛋白芯片技术答疑帖


蛋白质芯片技术是继基因芯片技术后发展起来的生物检测技术,是蛋白质组学研究中除了酵母双杂交、双向电泳技术、质谱技术等之外的一种重要的工具。蛋白质芯片技术具有平行、快速、自动化的优点,并且检测到的平行数据误差更 小,更准确,这对于高通量的研究具有非常重要的意义。它的出现对于生物学、临床检验医学、遗传学、肿瘤学等多学科的进步具有极大的推动作用。蛋白质芯片技术根据芯片上固定的物质不同又分为抗体芯片与蛋白芯片。


近几年来,随着抗体技术的发展,抗体库的建设速度越来越快,生产了大量优质的抗体,从而推动了抗体芯片技术的发展与应用,像Full Moon、RayBiotech等公司都推出了各有特色的抗体芯片。抗体芯片技术在生物医学领域也得到了较多的应用,可用于检测生理或病理过程相关蛋白的表达丰度、筛选疾病标志物、探索药物作用机制、检测信号通路中成员的激活状态。抗体芯片的这些应用也带动了相关科技论文的发表,数量与质量均呈上升趋势。
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lixi559[使用道具]
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LZ:怎么保证蛋白芯片的均一性呢?点的大小?等等。谢谢扫盲
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dragonkilly[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 lixi559 于 2013-4-24 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

LZ:怎么保证蛋白芯片的均一性呢?点的大小?等等。谢谢扫盲


蛋白芯片的均一性以及点的大小是由蛋白芯片的片基、抗体质量以及点样技术等综合决定的,好的芯片片基往往经过修饰,含有较多的官能团,对抗体的吸附能力强;抗体的质量则是指抗体具有好的特异性、亲和力;点样技术则包括常见的针点、喷点等技术以及液相蛋白芯片中的包被技术等;一款好的蛋白芯片往往是在这些方面进行不断的优化最终成型的。

同时,蛋白芯片制备质量的高低也保证了芯片杂交后片内、片间数据的重复性。
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orangecake[使用道具]
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按我的理解,蛋白芯片是不是更适合用于筛选啊?起原理是不是其实就是一种抗原抗体反应?
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dragonkilly[使用道具]
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相关疾病:
肿瘤

您的理解非常正确,现在的蛋白芯片基本上都是基于抗体抗原反应的,最常见的种类有抗体芯片(芯片上固定的是抗体,用于检测蛋白)、抗原芯片(芯片上固定的是天然蛋白、重组蛋白、多肽、细胞裂解液、组织裂解液等,用于检测抗体)。

蛋白芯片的应用根据芯片类型不同,可以用于筛选疾病标志物,肿瘤发生发展机制研究,药物作用靶点研究,蛋白新功能研究,信号通路筛选等等方面,以下提供几篇文献供有兴趣的老师同学参考。

Bernier M, Paul RK, et al.: Negative Regulation of STAT3-mediated Cellular Respiration by SirT1, Journal of Biological Chemistry 2011, JBC Papers in Press. Published on April 5, 2011 as Manuscript M110.200311.
Wang H, Brown J, et al.: Convergence of the Mammalian Target of Rapamycin Complex 1- and Glycogen Synthase Kinase 3-b–Signaling Pathways Regulates the Innate Inflammatory Response, Journal of Immunology 2011, 186:5217-5226
Kang S, Elf S, et al.: p90 Ribosomal S6 Kinase 2 Promotes Invasion and Metastasis of Human Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Cells, Journal of Clinical Investigation 2010, 120(4):1165-1177
Raharijaona M, Le Pennec S, et al.: PGC-1-Related Coactivator Modulates Mitochondrial-Nuclear Crosstalk through Endogenous Nitric Oxide in a Cellular Model of Oncocytic Thyroid Tumours. PLoS ONE 2009, 4(11):e7964
He H, Zong Y, et al.: Sensing the Insulin Signaling Pathway with an Antibody Array, Proteomics Clinical Applications 2009, 3:1440–1450
Yalcin A, Clem B, et al.: Nuclear Targeting of 6-Phosphofructo-2-Kinase (PFKFB3) Increases Proliferation via Cyclin-dependent Kinases, Journal of Biological Chemistry 2009, 284:24223-24232
Zhong D, Liu X, et al. LKB1 Is Necessary for Akt-Mediated Phosphorylation of Proapoptotic Proteins, Cancer Research 2008, 68:7270-7277
Zhong D, Li X, et al. The Glycolytic Inhibitor 2-Deoxyglucose Activates Multiple Prosurvival Pathway Through IGF1R, Journal of Biological Chemistry 2009, 284:23225-23233
SandipRay, et al. Classification and prediction of clinical Alzheimer’s diagnosis based on plasma signaling proteins Nature Medicine 2007,13, 1359
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qianqin1977[使用道具]
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蛋白芯片的基板最好是什么材料的?需要做哪些修饰?
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dragonkilly[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 qianqin1977 于 2013-4-24 16:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

蛋白芯片的基板最好是什么材料的?需要做哪些修饰?


蛋白芯片的基板可以是玻片、NC膜、PVDF膜等等。

基板为玻片的,可以进行氨基、醛基修饰;可以在玻片上包被琼脂糖薄膜;可以在玻片上固定NC膜的;也有公司专门开发了多聚膜,这种多聚膜可以更加牢固的结合抗体或者蛋白,提高芯片信号,降低背景。
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moonlight45[使用道具]
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请问蛋白芯片如何实现将玻片上固定NC膜,装置如何实现?硝酸纤维素膜会不会发生渗漏?请高人指点。
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moonlight45[使用道具]
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国家批准上市的蛋白芯片有一种是基于NC膜的(肿瘤标志物的检测),而且使用化学发光的方法。请问NC膜在使用时需要注意些什么?膜的孔径有要求吗?(0.45、0.22)这种蛋白芯片的点样是用点样针好还是用喷膜针好?请高人指点。
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nut6694[使用道具]
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咨询用蛋白芯片去筛选的话,对于动植物可以做吗?有相关案例文献吗?
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