【求助】蛋白电泳maker和样品的小分子条带...

蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】蛋白电泳maker和样品的小分子条带...

13 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】蛋白电泳maker和样品的小分子条带...

gemei0115[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76303
精华 0
积分 530
帖子 658
信誉分 101
可用分 4191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态离线

发表于 2013-4-25 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请大家比较这两个图，同样的分离胶浓度（15%）同样的各种溶液的配方，但是maker 的小分子条带14KD，跑不出来，目的蛋白的小分子也跑不出来，这是为什么？
因为我的目的蛋白14左右，如果不能解决这个问题，电泳就不能说明是否有表达
因为之前和现在跑出的效果一个好一个不好，不是操作问题，百思不得其解。求大神分析。

附件

2013-4-25 13:26

56868425.jpg (24.16 KB)

fei1226com[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79957
精华 0
积分 599
帖子 898
信誉分 100
可用分 5286
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态离线

发表于 2013-4-25 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

换Tricine胶试试看，Tris Glycine对小分子的分辨率不好

S6044[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75117
精华 0
积分 559
帖子 797
信誉分 100
可用分 4821
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2013-4-25 13:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

右面胶跑的时间太长？

gemei0115[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76303
精华 0
积分 530
帖子 658
信誉分 101
可用分 4191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态离线

发表于 2013-4-25 13:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 fei1226com 于 2013-4-25 13:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

换Tricine胶试试看，Tris Glycine对小分子的分辨率不好

因为我用Tis跑出来过，分子量在14，也不是太小，所以后来一直是用的这个方法。
发这个帖子就是想看看为什么会出现这个问题，求各位大神的意见。
如果实验还是进行不下去，只能换别的胶了。

gemei0115[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76303
精华 0
积分 530
帖子 658
信誉分 101
可用分 4191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态离线

发表于 2013-4-25 13:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 S6044 于 2013-4-25 13:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

右面胶跑的时间太长？

跑胶的时间和之前正常的电泳图所用的时间是一样的，而且如果时间长的话应该分离的更好（理想情况下）

S6044[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75117
精华 0
积分 559
帖子 797
信誉分 100
可用分 4821
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2013-4-25 13:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

奇怪啊，是不是也和浓缩胶高度有关？

gemei0115[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76303
精华 0
积分 530
帖子 658
信誉分 101
可用分 4191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态离线

发表于 2013-4-25 13:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 S6044 于 2013-4-25 13:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

奇怪啊，是不是也和浓缩胶高度有关？

浓缩胶的高度也和以前差不多的，现在的现象就是在最低端会压成一条线，而且小于14的蛋白都被压在这条线上，包括maker的最后一个小分子条带。不知道有没有人出现过这个问题。

S6044[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75117
精华 0
积分 559
帖子 797
信誉分 100
可用分 4821
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2013-4-25 13:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 gemei0115 于 2013-4-25 13:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

浓缩胶的高度也和以前差不多的，现在的现象就是在最低端会压成一条线，而且小于14的蛋白都被压在这条线上，包括maker的最后一个小分子条带。不知道有没有人出现过这个问题。 ...

呃
我以前好像也有过这样的情况

外液的配比？猜的

gemei0115[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76303
精华 0
积分 530
帖子 658
信誉分 101
可用分 4191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态离线

发表于 2013-4-25 13:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 S6044 于 2013-4-25 13:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

呃
我以前好像也有过这样的情况

外液的配比？猜的

你说的外液是指什么？tris-gly-sds电泳缓冲液？

S6044[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75117
精华 0
积分 559
帖子 797
信誉分 100
可用分 4821
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2013-4-25 13:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #9 gemei0115 的帖子

恩，感觉和缓冲液有关

13 1/2 1 2 ››