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标题:【讨论帖】每升菌液的包涵体产量问题

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-4-25 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】每升菌液的包涵体产量问题


最近要购买质粒表达包涵体，与某公司的技术人员交流。对方直接说能达到每升菌液几十克包涵体的水准。这点确实让我不敢相信。之前做表达的时候一般顶多也就是一克左右的样子，也许是在下人品太糟糕。
请问诸位，您做表达时能达到何种水平？
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S6044[使用道具]
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发表于 2013-4-25 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

和表达蛋白，诱导条件什么的都有关系。
公司的人说的肯定是最理想状态，表达在这个量并不稀奇。
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-4-25 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 S6044 于 2013-4-25 13:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

和表达蛋白，诱导条件什么的都有关系。
公司的人说的肯定是最理想状态，表达在这个量并不稀奇。

您做表达的时候，最后的干燥包涵体能达到几十克的水准么？？这确实对我是个好消息，非常感谢
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-4-25 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这就牵扯到一个很糟糕的问题，我找的是EGF包涵体的表达质粒。目前EGF蛋白的国内某厂最高产量貌似是每年300克左右。而一个简单的200升发酵罐，一次产量就可以达到公斤级别。这得啥样的低效的复性效率才能出现这种情况呢！？这确实没法让我相信。
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S6044[使用道具]
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发表于 2013-4-25 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zwsyrt 于 2013-4-25 13:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这就牵扯到一个很糟糕的问题，我找的是EGF包涵体的表达质粒。目前EGF蛋白的国内某厂最高产量貌似是每年300克左右。而一个简单的200升发酵罐，一次产量就可以达到公斤级别。这得啥样的低效的复性效率才能出现这种情况呢！？ ...

我自己也没表达出过这么高的产量。

我的意思是您表达一个EGF和表达一个GFP的量绝对可能差1-2个数量级以上。你不如去问问厂家是拿什么条件表达什么蛋白得到的数据。
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-4-25 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 zwsyrt 于 2013-4-25 13:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这就牵扯到一个很糟糕的问题，我找的是EGF包涵体的表达质粒。目前EGF蛋白的国内某厂最高产量貌似是每年300克左右。而一个简单的200升发酵罐，一次产量就可以达到公斤级别。这得啥样的低效的复性效率才能出现这种情况呢！？ ...

1L菌高密度发酵拿个几十克包涵体，是没问题的，但是一般说的是湿包涵体，您说的干包涵体，没做过，一般不会让包涵体干燥了去做下一步的试验的。

另外EGF包涵体复性，效果不好，活性也差很多，为什么不用酵母呢？

我们用酵母分泌表达的EGF，活性高，产量也非常不错，稳定性好，而且纯化工艺简单，这个也是目前很多人在用的工艺！只是现在EGF没什么市场，做起来也没有意义了！
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发表于 2013-4-25 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 vivian4123 于 2013-4-25 13:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


1L菌高密度发酵拿个几十克包涵体，是没问题的，但是一般说的是湿包涵体，您说的干包涵体，没做过，一般不会让包涵体干燥了去做下一步的试验的。

另外EGF包涵体复性，效果不好，活性也差很多，为什么不用酵母呢？

我们用酵母分泌表 ...

我就是做包涵体复性研发的，对酵母途径没兴趣。
另外好奇的问一句，您所做的酵母途径能达到何种表达程度。如果涉及商业机密就算了。非常感谢！
干包涵体也是正常情况下很自然要获得的，用无水乙醇去除内毒素之后，稍微晾一下自然也就是干包涵体了吧！
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-4-25 13:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 S6044 于 2013-4-25 13:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


我自己也没表达出过这么高的产量。

我的意思是您表达一个EGF和表达一个GFP的量绝对可能差1-2个数量级以上。你不如去问问厂家是拿什么条件表达什么蛋白得到的数据。 ...

非常感谢您的信息！
也问了销售商，可能是我最初的表现太过于明显，人家的自尊有些受伤吧！人家干脆不怎么搭理我了！！人品问题，人品问题！！呵呵
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zwsyrt[使用道具]
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 小中大

EGF烟台康达尔每年340克的产量就称王称霸，每克现在的售价大约能到60万。这个市场只能说是还没有真正的王者，并不是没有人去认识。
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vivian4123[使用道具]
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 小中大
EGF烟台康达尔每年340克的产量就称王称霸，。这个市场只能说是还没有真正的王者，并不是没有人去认识。

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每克能到60万?
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