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标题:【求助】蛋白质浓缩

flyxx05[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白质浓缩


蛋白质用透析袋浓缩时，是把PEG涂在透析袋上好，还是把PEG放入水里好呢
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 flyxx05 的帖子

最好是涂在透析带上，效果要好一些
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最简单的办法就是将粉末状的PEG覆在透析袋外面，一般用PEG8000或分子量更大一些的。不断更换PEG会加快浓缩速度。
另一种PEG浓缩的办法是在溶液中加入PEG至终浓度30%，离心就可以了。
前者简单，后者如果蛋白浓度很低的话，可能收率会很低（具体数据我没做过）
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发表于 2013-4-27 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想把蛋白除盐，能介绍一下透析袋透析吗？
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

透析袋是最常用的方法，透析袋有各種大小不同的網目，可以分開分子量不同的大小分子。常見的透明年糕紙，也有近似透析袋的作用；而香腸的腸衣也正是一種透析膜，可以透出水分及小分子。
透析除盐原理：利用半透膜原理，透析袋为半透膜，水分子和盐离子等小分子可以自由通过，而大分子的蛋白质不能通过.
器材：
１．  pH7.4，0.01M PB缓冲液，30%PEG
２．  纳氏试剂
操作：
１．  透析大量除盐：将装有粗提物的透析袋悬于烧杯内，用透析1~2小时，再用PB置4℃透析换液多次，用纳氏试剂检查至透析液内无氨离子
２．  透析后，袋内水增多，用30%PEG浓缩,方法参考楼上.
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popo520[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
求助：PEG20000浓缩后，跑SDS电泳，发现分子量变大（约大了5000左右），是不是PEG的影响？应该怎么办？
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主遇到的问题我在PEG20000浓缩时也遇到过，我认为PEG20000是一个平均分子量，有的小分子通过透析袋进去，可对蛋白质电泳行为造成影响，1）分子量变大；2）电泳条带成弧形。如果你对此不能肯定，可将部分样品用丙酮和硫酸铵沉淀后同时跑电泳。看看电泳情况，再对试验方法进行调整。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

干吗不用超滤？离心机上20分钟就OK了。
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白质浓缩、脱盐之类的可以用超滤的方法，尤其是小体积样品的处理。我前两天订购了millipore的超滤离心管，用的是截留分子量为50kD、最大处理量为500微升的，4℃、14000g、20分钟后剩余10微升左右。关于超滤，在园子里搜一下就可以找到很多帖子。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2013-4-27 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得如果是大量的初始物浓缩除盐的话，还是用透析袋比较经济，毕竟millipore的好东西不是那么便宜：）
同时问一下：
1.我见过有人用蒸馏水作透析液，4度24小时透析，那么它和PBS比，有什么不同吗？
2.“用纳氏试剂检查至透析液内无氨离子”是为什么呢？
3.大量透析后，用冷冻干燥的方法来浓缩是不是更好呢？
请指教。
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