小中大或许我列举的这篇blood上的文献不是最恰当的离子,或许该文在不同的样品有不同的选择或者是两种方法的结合。另外我的截图所示的内容应该也是正确的,也说明了作者用到了染色这种方式做control。
另外你可以看看搜索链接中的其他文献(当然只是其中的一部分,非全部)。总之,我认为这种方法 肯定是可行的,并是得到认可的。
在列举个例子吧,是nature上的一篇lettter:The ADP/ATP translocator is not
essential for the mitochondrial permeability transition pore(截图见下)
另外我也咨询过abcam公司香港分公司的技术支持,他的意见也表明这种染色的方式是可选的。【见截图】
此外,我觉得还需要注意的是,对于目前常用的以一些管家蛋白如GAPDH,actin等,虽然在WB实验中在广泛使用,但并不代表他们就是没有缺陷的,近年来不少资料都显示这些管家蛋白并不一定是“假想的恒定表达”,还是有受到到质疑的地方。 也就是说,这些control的方式都不完美,还需要做不少的工作找到一个合适的control
故而,这些方式,不管是管家蛋白,还是立春红或考马斯亮蓝染色等 都是可选的。
实际上染色的方式,还节省了买抗体的钱,对于不少实验室来说,还是很值得的。
β-Actin is not a reliable loading control in Western blot analysis Electrophoresis 2006, 27, 2844–2845
下面两篇文献都说明立春红或考然是可以用作loading control的,可以看看【同时其中JPR的文献也说明GAPDH做内参也有局限性】
Analytical Biochemistry 401 (2010) 318–320
J. Proteome Res DOI: 10.1021/pr1011476