小中大【求助】准备用millipore 的超滤离心管从细胞培养上清液中浓缩蛋白，在园子里找到一些关于浓缩蛋白的一些帖子，但还有些问题还是向园子里的大虾请教一下。
我们定的是Amicon Ultra 15ml规格的管子，不知道有没有谁以前做过的，有关于转速，时间给一些建议，另外细胞上清液离心前是否需要什么预处理？
离心之后回收蛋白时怎么尽量减少损失？
如果要把管子重复利用，NaoH清洗后，如何在20%的乙醇中保存？是将其浸到乙醇中防于4度，还是在管子中灌入乙醇？
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【回答精要】
我用过5ml的管子，当时使用的转速是4000rpm 8min，可以把5ml的样品液浓缩到约200ul，这仅供参考，具体情况还要由您的样品决定。
我保存5ml管子的方法是把内管取出，浸泡于装有20％乙醇的烧杯中。四度保存。
该种管子可以脱盐浓缩但不宜根据截留半径做分离蛋白用。
我用的是3500g，4度离心，时间可以自己控制，取决于你最终的浓缩体积，我一般是200ul左右。
千万别一下离心时间太长，不同的蛋白浓缩的速度不同，有的需要长时间离心，有的则一下子就好。当然也和你的蛋白是否比较纯，所用的是什么buffer，还有蛋白的浓度有关系。所以离心时要先短些时间观察一下你的浓缩速度，不要一下子浓缩过了，甚至形成沉淀就得不偿失了。
另外其实他们的管子都设计的是一次性使用，所以如果想重复使用，不要离得速度太高，4000－4500RPM就差不多了，另外重复使用时要看看管壁上有没有裂纹，现在的管子好像不如从前的结实了。
用后把管子用纯水洗干净，离心少时，洗一下膜，再象propeg主任说的那样收起来即可。使用多次后若觉得有些堵，就可以用NaOH泡泡，离心几分钟，应该会有改善。
祝实验顺利。
纯化多肽，截断分子量可以选10倍，纯化球蛋白，截断分子量可以选3倍，如管子要重复使用，转速设最大转速（G）的80％左右，不然时间长了塑料就裂了，膜也容易出问题。
离心后管子用MilliQ水清洗干净，浸泡在水中，4度保存就行了，不放心就放点防腐剂，但是这个管今后只能用来离心同类的样品哦。
超滤损失蛋白是正常的，样品体积大就分批离心，别搞的离心时间太长，样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
