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标题:【求助】内毒素去除的新方法

wood533[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】内毒素去除的新方法


通常去除内毒素的方法大多是过离子交换柱或者用萃取的方法,当然也有用亲和柱子的,可是都存在一个问题那就是处理的量小或者效果不好，我要介绍的方法是：
我们把去内毒素的亲和填料直接加到样品中，在室温或冷室中震荡，每隔6个小时检测上清的内毒素，直到合格为止，这样的好处是处理量大，操作简单，而且可以很方便检测，我觉得非常好用，下面是具体的方法：
实验步骤：
1．  将去内毒素琼脂糖凝胶FF在滤器中先用1－2倍凝胶体积的Buffer A抽洗，再用3－5倍凝胶体积的Buffer A将凝胶充分混匀，保持10min，用50－100倍凝胶体积的注射水分10－20次抽洗。
2．  根据样品溶液中内毒素的含量加入一定量经上述处理的去内毒素琼脂糖凝胶FF，于三角瓶中4℃、150rpm振荡48h。
3．  将以上样品无菌过滤，测内毒素含量。
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hustwb[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的内毒素亲和填料是什么样的?是买的现成的吗?什么型号?
谢谢!
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 hustwb 的帖子

就是琼脂糖亲和凝胶,配基是小分子的,是现成的产品
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问去内毒素琼脂糖凝胶可以反复使用吗？还有如果样品是带负电的酸性多糖，该凝胶在吸附内毒素的同时是否也损耗样品？
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以反复用的,我们的实验就用去除带负电荷的样品,它很特异去除内毒素,不是靠离子交换的作用,因此样品损失很小,我们做的不到5%.
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

紧急：请问你们这种填料取出内毒素的效果如何？去除前后内毒素的含量各是多少Eu/ml？？谢谢！
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
效果不错,有药厂就在用,我们也用这个方法和填料去除病毒,核酸,和蛋白中的内毒素,没有处理前是几千EU/ml,处理后可以小于10EU,而样品回收率在95%左右.
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问这种内毒素琼脂糖凝胶FF是不是DEAE Sepharose Fast Flow？
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
和活性炭吸附效果相比怎么样？
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-4-29 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问这种内毒素琼脂糖凝胶FF是不是DEAE Sepharose Fast Flow？

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不是，这种填料只吸附内毒素，对别的物质没有影响，DEAE在内毒素含量很高或样品和她带一样电荷的情况下没有办法去除，和活性炭比它的效率更高，同时活性炭对样品也吸附很厉害，回收率不高。我们做过活性炭去除质粒中的内毒素，只能做到100-200EU,而样品回收率小，而用这种填料回收率高，去内毒素高的可以做到小于5EU/mg
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