蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【分享帖】蛋白质纯化武器-设备篇

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【分享帖】蛋白质纯化武器-设备篇

feima+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77651
精华 0
积分 424
帖子 547
信誉分 100
可用分 3561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
1
 

【分享帖】蛋白质纯化武器-设备篇

工欲善其事,必先利其器。对照一下,你的实验室还缺那些?

(1)超声波细胞破碎机
适用于5-100g湿菌体超声破碎,实验室规模用。一般可选择直径10、15、20mm的超声探头。推荐国产机器为宁波新芝。

(2)高压匀浆机
大规模生产用,对菌体量无限制。破菌效果好,但要注意冷却。

(3)高分散乳化机
均匀悬浮菌体用,比搅拌快,均匀性好,特别适合于大规模生产。另外,大规模生产时缓冲液的配制很有用,可快速溶解、混匀。推荐品牌:IKA 国产品牌:FLUKO;

(4)中空纤维超滤柱
大规模生产时做菌体收集用,要配合大蠕动泵及压力表。
小规模研发时也有用做浓缩的,但感觉死体积比较大。

(5)高速冷冻离心机
小试、中试菌体收集用,破菌后离心,包涵体溶解后离心、小规模离心超滤等。推荐品牌:BECKMAN、日立、Eppendorf

(6)磁力搅拌器
就是搅拌用了。缓冲液配制,包涵体溶解等。推荐品牌:国产的都行,最好配4或6工位的。

(7)真空泵
离心上清过滤、缓冲液过滤、样品过滤等。推荐品牌:Millipore WP61型。

(8)过滤器
同真空泵配合使用。推荐品牌:Sartorius烧结金属垫板的不锈钢50mm滤器。

(9)pH计
缓冲液配制、样品pH调节用。推荐品牌:梅特勒

(10)电导仪
就是测定缓冲液及样品的电导了,做离子交换层析有时候要用到。

(11)纯水仪
如果没有管道系统的纯水设备,那就必需要的了。至少也是要去离子水、双蒸水或三蒸水。推荐品牌:MINI Q

(12)紫外可见分光光度计
测定蛋白浓度。推荐品牌:Beckman,岛津

(13)核酸蛋白检测仪
纯化时在线监测。如果不是用AKTA、Bio-Rad之类的高级仪器,就必须要了。

(14)蠕动泵
简单纯化系统用、包涵体稀释复性。推荐品牌:兰格、GE公司P50。

(15)纯化系统
高级的纯化系统了。推荐品牌:AKTA explorer、AKTA Purifier。不推荐bio-rad的DUOFLOW。

(16)膜超滤器
蛋白样品浓缩、缓冲液置换、以及药品级蛋白纯化时缓冲液的去内毒素用。推荐品牌:Millipore Labscale、Pellicon(泵可用国产的兰格)

(17)蛋白电泳仪
SDS-PAGE、Westblot用。推荐品牌:Bio-Rad,国产上海天能。

(18)脱色摇床
电泳染色、脱色用。

(19)制冰机
破菌时冷却用。
顶部
feima+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77651
精华 0
积分 424
帖子 547
信誉分 100
可用分 3561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
2
 
(20)恒温培养箱
融合蛋白酶切去除tag时恒温用,做ELISA时用。

(21)凝胶成像仪
就是给电泳胶及WB拍照片用,要配照片打印机哦。就是一台数码相机,硬件各品牌没有本质差异,主要看那家的软件做的好,界面友好。

(22)电磁炉
加热电泳样品,方便,快捷。

(23)微波炉
电泳考染脱色。加热水,溶解尿素、硫酸铵等。

(24)微量取样器
就是枪了。从1ul到5ml都要的。还有一种电动的,可以用刻度吸管。推荐品牌:Gilson,eppendorf

(25)超净工作台
做蛋白样品的无菌过滤用。

(26)冰箱
不说了。

(27)电风扇
小量样品的浓缩风干。
个人感觉10-200ml的样品浓缩最为方便,比超滤、PEG等方法简单实用。

(28)电子天平
称重了。两种精度:0.1mg和0.01g。推荐品牌:梅特勒

(29)空调
这个我相信大家都不会反对,也是蛋白纯化对环境的要求。

(30)超声波清洗机
缓冲液脱气用,当然也可以采用真空泵抽真空的方法。特别是做疏水层析时,有机溶剂与水相混溶时脱气。

(31)酶标仪、洗板机
测定蛋白质免疫活性用。特别当我们纯化的蛋白原料含量很低时,SDS-PAGE无法有效监测就必须应用Elisa方法。
顶部
feima+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77651
精华 0
积分 424
帖子 547
信誉分 100
可用分 3561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
3
 
(32)恒温干燥箱、干烤箱
恒温干燥箱用于玻璃器皿、一般塑料件洗涤后的干燥,设定温度40-60度。
干烤箱用于干烤灭菌,内毒素去除等,设定温度180-220度。

(33)酸缸
就是做细胞培养常用的那种浸泡容器的东东,对药品级的蛋白纯化要求容器都要用酸缸泡过。

(34)UPS电源
保护层析设备,防止数据丢失,生产必备。

(35)层析冷柜 低温冷室
4度双门的那种大冷柜,可以把层析柱放进去,对温度敏感的蛋白纯化需要。
冷室作用同上,更彻底,只是运行费用更大。

(36)冷冻干燥机(器)
蛋白质保存较佳的方案。从手提式到药厂的大规模冻干室形式多样。

(37)不锈钢层析柱架、三叉夹
柱架有商品化的卖,但是没有自己DIY的好。可以自己设计好后找做不锈钢窗户的小店去做,很便宜。
夹层析柱的夹子首选三叉夹,很牢靠,最大可以夹50mm的GE夹套XK柱。

本帖仅做引玉,大家可以就每项设备展开讨论,看看那些东东,那些品牌对我们做蛋白质纯化的人来说是好用的。
本人会不断完善此帖,希望大家支持。

相关篇:

【原创】蛋白质纯化武器—工艺篇(欢迎补充) [精华]
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/15298689')

【资源】蛋白质纯化武器-资料篇(欢迎补充)
cuturl('http://protein.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=17703087&sty=1&tpg=1&age=0')
顶部
redbutterfly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76433
精华 0
积分 701
帖子 1102
信誉分 100
可用分 6281
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
4
 
概括的非常全。
实验室规模的中空纤维系统(4)可以代替高速离心机(5)和超滤器(16)。
除设备之外,另一个有用的东西就是各种各样的层析填料了,可以把省下来的钱购买更多的层析填料。
顶部
feima+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77651
精华 0
积分 424
帖子 547
信誉分 100
可用分 3561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
5
 
哈哈,层析填料我想单独列一个篇章发帖,它既不属于设备(公司里不在固定资产范围内),也不是常规的耗材试剂,是个耐用的耗材吧。另外计划中的姊妹篇:资料篇和工艺篇。
这样总共四个篇章吧:设备篇、填料篇、资料篇和工艺篇。
顶部
JK.jon[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75188
精华 1
积分 528
帖子 652
信誉分 102
可用分 4146
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
6
 

冷冻干燥机(蛋白纯化后的冻干)推荐一款吧
顶部
DDD[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73222
精华 1
积分 587
帖子 790
信誉分 102
可用分 4768
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
7
 

最好能够有一个干烤箱,可以对要求较高的蛋白质纯化(如不能含有内毒素等热源)中使用的烧杯等容器高温处理。
顶部
bs4665[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75127
精华 0
积分 505
帖子 650
信誉分 100
可用分 4136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
8
 
楼主总结的相当全面了。
我再提两个附属的设备,一个是恒温水浴循环系统,有时候你的层析柱需要保温;另一个是UPS电源,为了保护你的重要层析设备等的供电,难免的突然断电会对层析设备造成大的损伤,也会使你丢失来不及保存的重要实验数据。
与检测相配套的还有个重要的设备也是必不可少的,就是HPLC,做纯度分析或含量检测总是少不了它。
顶部
loli[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 71788
精华 0
积分 736
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6650
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-31
状态 离线
9
 
写的不错,

但是楼主说 IKA 是国产的,我很不明白。

(3)高分散乳化机
均匀悬浮菌体用,比搅拌快,均匀性好,特别适合于大规模生产。另外,大规模生产时缓冲液的配制很有用,可快速溶解、混匀。国产品牌:IKA
顶部
feima+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77651
精华 0
积分 424
帖子 547
信誉分 100
可用分 3561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
10
 
bio-rad 蛋白纯化仪

=============================================================================================================

个人经验,不推荐。

楼主总结的相当全面了。
我再提两个附属的设备,一个是恒温水浴循环系统,有时候你的层析柱需要保温;另一个是UPS电源,为了保护你的重要层析设备等的供电,难免的突然断电会对层析设备造成大的损伤,也会使你丢失来不及保存的重要实验数据。
与检测相配套的还有个重要的设备也是必不可少的,就是HPLC,做纯度分析或含量检测总是少不了它。

谢谢,恒温水浴好像很少用,但层析冷柜是常用的,已加上。
UPS一般试验室很少配,不过是应该有的,已加上。
HPLC在通常意义上讲是属于蛋白纯化设备,但无论在研究部门还是公司、药厂,它还是属于QC部门的多,真正用HPLC做制备纯化的不多,考虑再三还是不加了。
顶部