液相色谱

求助各位亲，用watersC18柱，常温检测，流动相是20%乙腈80%磷酸缓冲液，1ml/min，前几次做的时候还好，这次做的柱压一下子高了起来，都超过设定上限4000psi了，以前只有1700psi左右，我先用纯甲醇冲0.5ml/min，压力下降到600psi，换成50%甲醇50%纯水，结果半个多小时后柱压又到2000多了（1ml/min则为4000多），换了纯水源再试结果还是这样，再换成纯甲醇一会儿压力又下降到600，如此循环。。。（开始怀疑是水的问题，换了两次水源，每次都用有机膜抽滤两次，结果还是不行）求救哇求救哇。。。

首先HPLC用水要过滤，再就是你循环的方法就不对啊，用缓冲盐做完样后要用15%乙腈冲洗柱子，如果你用缓冲盐流动相做样一天，最好小流速冲过夜,把柱内的缓冲盐都要冲洗出来，才能换有机相冲,完了要有机相保存。

是不是柱子被堵住了？
重新蒸水，用水膜过滤，流速调小些，洗的时间长些。

直接接双通 走纯水 高流速 2--3ml/min 冲洗  先排除机子堵塞，什么单向阀堵塞等等，冲完之后保险起见用5%的稀硝酸冲洗30min 你在看看 怎样 ！@！！！还不行 那就换另一根柱子 看看压力情况，
  若真的证明是柱子堵塞 建议 吧柱子反接 用0.3的流速 90%水 冲洗

5%硝酸冲柱子 你柱子不想要了吗？lz 你之前走的是什么样品？显然是有杂质堵柱子了 如果纯甲醇纯乙腈冲洗没用的话 可以尝试用DMF或者DMSO低流速来洗一下柱子 主要还是要根据样品种类来选择对应的洗涤剂 比如蛋白样品的话可以选用蛋白酶来洗 供参考

关于柱子的反冲 是可以的 但一般不推荐 容易造成塌陷 所以我一般将反冲作为最后的方法 反冲的时候流速一定不能高

C18 一般不能反接 ，这只是理论上，实际上：一般柱子若是柱压高，通过洗柱的方法还没能降低压力，可以反接用低流速冲洗的，一根柱子一般堵塞或者填料坏了，都是柱头部位的1-3mm处，除非有专业的工具用来装填。不然你堵塞后正向冲洗会更加堵塞，反接效果会更好

若是峰形分叉，说明柱子已经到了生命的极限，一般再生后会拖尾等等，若要求不高可以继续使用。相反可以反接继续使用，一般反接后峰形会变好，拖尾会减少，但是柱的使用寿命几乎完结，反接后的柱子不在建议再次正接后使用，若这柱子已经废弃，可以采纳

一般学校老板的项目奖金不多时或者抠门时可以这样用。

向我们做研发时这样用，申报资料时就不用。视情况而定

1、这样看的话，一二针都不出峰，第三针在奇怪的时间出了奇怪的峰，说明你柱子确实有了问题，接双通1ml/min20PSI，系统应该没多大问题，柱子是不是用的时间太久了？建议lz以后如果做样，流动相用的是乙腈缓冲盐就用10%乙腈过渡，乙腈保存，甲醇缓冲盐就用甲醇水过渡，甲醇保存，有的样在不同溶剂溶解度相差很大，进系统有可能析出，对柱子和系统都有损害，直接降低柱子使用寿命，这样样品也不会出峰的。
2、除非系统很脏，5%稀硝酸是冲系统，是不能过柱子的，检测器好像也不能接。
3、要是这个柱子用的时间太久，正常使用已不能满足要求，C18可以反冲，反正都快报废了，反冲使用有时候还能用。

柱子堵了，首先确定是无机盐堵塞还是溶剂质量不好造成的堵塞，如果无机盐堵塞你就只能用纯水加点醋酸这样冲，如果是溶剂不好造成的堵塞可以考虑用强溶剂配成水溶液冲洗，比如1%的异丙醇

倒接，用异丙醇低流速冲冲，别接检测器
个人建议 仅供参考