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标题:[未解决]在进行荧光扫描出现了倍频峰才能加滤波片吗?

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雨儿[使用道具]
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在进行荧光扫描出现了倍频峰才能加滤波片吗?

我是菜鸟,请教一个问题。我在进行荧光扫描的时候(以280nm激发),虽然没有出现倍频峰,但是我还是做了个小测试,加了滤光片(滤波范围在500到600的样子),结果出来的荧光图谱完全变了,这是为什么?难道没有出现倍频峰就不能添加滤波片吗
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落叶无声[使用道具]
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加不加滤波片是由你的实验需要所决定的,倍频峰是都会有的,如果能产生荧光峰,并且强度还不错的话,一般倍频峰就被相对弱化了。如果不想被倍频峰影响,可以将扫描范围设置为不包括倍频峰的范围,比如你这个可以设置在300-550nm左右,你自己看荧光峰的情况定(当然这个范围要包含你的荧光峰)。滤波片分发射的和激发的两种,用不同的滤波片,会相应地减弱激发光或发射光(荧光)的强度,也会减弱倍频峰的强度。
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我是夜猫子[使用道具]
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第一,一般的液体检测应该是不加滤光片的,因为你加了会减弱荧光峰的强度,如果遇到几种物质同时检测,若有特殊需要才会按情况选择滤光片。
第二,如果没有必要是不需要加滤光片的,你好像把它当成了一个必须要选择的参数,你好像在这里存在误区,如果不要滤光片你的谱图能更好看,荧光检测限能更低,那么滤光片不是物极必反了么。另外,excitation filter是对激发光的波长进行滤光的,不管你选的是激发模式还是发射模式,都会存在着激发光源和发射光源,选excitation filter则是对激发光有用,选emcitation filter则是对发射光源有用。
第三,滤光片在我的了解范围内至少分为长波滤光片和短波长滤光片,打个比方,你选短波长350nm的excitation filter,那么意思就是激发光350nm以下的波长都会被滤一下,也就是减弱的作用。其它的类似了。
这些是我个人的经验,希望能帮到你~
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倾尽温柔[使用道具]
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你这加的是激发的335-620nm滤光片么?这可能跟你样品的性质有关。
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星星……[使用道具]
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应该是可信的,加滤光片是一种手段吧,应用得当能得到好的结果应该是可信的,你可以问下导师啊。
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