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标题:[未解决]胶原蛋白的电泳为什么跑不出来?

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
翔少爷[使用道具]
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胶原蛋白的电泳为什么跑不出来?

自己从鱼鳞里提了些胶原蛋白,跑了个电泳(SDS-PAGE,考染),但没有条带。其他的蛋白、marker什么的都能跑出来,为什么就这个跑不出来?是不是蛋白浓度太低了?
我后来用较高浓度的蛋白的酶解液(碱性蛋白酶,不完全酶解),也跑不出来,这是为什么啊???
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小米粒[使用道具]
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请问较高蛋白含量是多少?测过蛋白含量没?
上样缓冲液是什么?  加完之后怎么处理的咩?
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星星……[使用道具]
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会不会是分子量太大,形成交联卡在上样口了……
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kaixinjiuhao[使用道具]
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如果不是分子量太大的问题,建议将样品缓冲液冻干一部分,或者以超滤等方法,提高目的蛋白的浓度后,在进行电泳
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大球球[使用道具]
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会不会是酶解液ph偏离中性 影响电泳
胶原蛋白分子量在100-300KDa之间,这个SDS-page一般跑不动,所以每条带。你酶解后要是水解充分成小分子肽,只要分子量小于10KDa,甘氨酸SDS-page跑不了这么小分子量的蛋白,可以尝试一下Tricine-sds-page
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美丽婷婷[使用道具]
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Tricine-SDS-Page相对于我们常用的Glycine-SDS-Page来说它用Tricine替代了尾随离子Glycine,由于尾随离子性质的差异,使得Tricine-SDS-Page更适合跑小分子量蛋白,特别是分子量小于10KDa的小分子蛋白或多台,而且电泳时间缩短。
样品每条带考虑一下是不是样品浓度过低,我以前跑的时候样品浓度低也是每条大的。
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双_视野[使用道具]
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你把酶解后的溶液浓缩后上样试试看,如果出现条带就是以前浓度太低,如果还没有智能再找原因了
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莫莫莫[使用道具]
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酶解后  分子量太小了吧?估计都跑出去了。。。。。用下tricine体系的
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千里之外[使用道具]
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有可能真是跑出去了
你再重新测测
祝你好运哟!
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today@[使用道具]
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很明显胶原没提好,建议先跑个电泳看一下,而且鱼类和 哺乳类组成差别很大,不同的鱼类氨基酸差别也很大
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