原子吸收

我用咔唑比色法测定果胶含量，做标准曲线时，发现沸水浴之后加入咔唑乙醇溶液以后，溶液变成绿色。查了一些资料说可能是铁离子影响掩盖了紫红色的显现，可以考虑用优级纯的浓硫酸。可是换成用优级纯的浓硫酸后还是出现了同样的问题，请大家帮忙找找问题吧，谢谢啦！

多年前我也遇到过这样的问题。为了做这个标准曲线居然用了2周的时间，反复筛选排查后发现，的确是硫酸的问题。
不同厂家生产的硫酸是不同的，同一厂家生产的不同批次的硫酸也是不同的。建议你多找几家、几个批次的硫酸试试。

我没用碰到过 加咔唑前淡淡的红色 加过颜色更深一点而已
不知道是咔唑的问题，还是浓硫酸的问题。

用硫酸咔唑比色法制作半乳糖醛酸的标准曲线。参考文献是 Bitter T, muir HM. A modified uronic acid carbazole reaction. Analytical Biochemistry, 1962, 4: 330-334.  强烈建议参考该文献进行试验。

我当时用的浓硫酸是 淄博化学试剂厂 的分析纯的。

几个注意的地方：
（1）向试管中先加浓硫酸，再缓慢加入样品，顺序不可颠倒。【这一点与常规的操作方法不一样了】
（2）反应要置于冰水浴中，保证混合液温度不高于室温。
（3）混匀时要缓慢，防止其剧烈放热。
（4）所有混匀均为摇匀，不可将试管反复倒置混匀。

希望能对楼上的几位有所帮助。

我毕业论文做过这个实验，开始也是出现绿色（当三价铁离子含量>0.00005Mol/L时会出现绿色），换了一批硫酸还是不行，后来把配试剂的水全换成超纯水之后就可以了。楼主可以把硫酸、水、乙醇都换一下试试，不出现绿色的话线性一般都很好的。

我将我试验的现象发给大家，左侧第一个是用水做的空白，是绿色的，其余的是用半乳糖醛酸做的标准曲线。我也很疑惑，同样的处理方法，处理条件，也出了两种效果

是硫酸的问题，必须是优级纯才行，不要用分析纯的，一般分析纯的铁离子浓度不稳定，有的厂家高，而有的厂家低，不同批次的也不一样。
首先，保证优级纯硫酸不被污染；
其次，实验过程中的移液管必须刷洗干净，不含铁离子；
再次，实验用水必须是去离子水级别的，也不能喊有铁离子；
还有，咔唑等的试剂瓶必须用去离子水刷洗干净；
否则，依然会有绿色出现。

不过，我想请教一下，我用同一试剂，同样的处理，空白组出现了绿色，而使用半乳糖醛酸组却是紫红色的，原因是？

有可能是移液管和试管没有刷洗干净，即使铁离子在0.00001mol/L左右时，空白组也会是浅绿色。因为这种情况下铁离子浓度较低产生的是浅绿色，不足以掩盖半乳糖醛酸所产生的紫红色，故空白组出现了绿色，而使用半乳糖醛酸组却是紫红色的。另外，实验过程中注意滤纸的使用，要用较好的滤纸以免在擦拭移液管时污染试剂。

我使用的硫酸是优级纯，乙醇没有精制，水使用的是二次重蒸自来水。
1.我感觉不是药品的问题，因为我在实验之初，结果都是呈紫红色的，而在实验过程中期（未更换任何药品，均为同一批次），却出现绿色。
2.至于反应条件（时间、温度）的控制也尝试调整过，但在同一组平行试验中，条件相同，有的为绿色，有的为紫红。
3.清洗的问题，因为有一次实验所有12组，均呈现绿色，要是这么多试管都没洗净，可能性也不大，但再次用同样的药品重做是，呈紫红色。