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标题:[未解决]为什么检测提取液里可溶性葡聚糖含量特别低？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
outeer[使用道具]
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发表于 2013-5-4 23:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么检测提取液里可溶性葡聚糖含量特别低？

我用水作溶液，调节pH=10(碱性) 80℃下，提取3h,提取液再用中温α-淀粉酶（pH=6,70℃）去淀粉，等电点法去蛋白制备提取液。然后经刚果红缓冲溶液与提取液反应。测定吸光度。测定的β葡聚糖含量极低，非常困惑。请相关研究者指教，谢谢
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冰@舟[使用道具]
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发表于 2013-5-4 23:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果淀粉酶不纯，其中可能含有一些葡聚糖酶，在水解淀粉的同时也会部分水解葡聚糖，使醇沉的多糖量减少。多糖得率可以达到12%应该是很高了，你的上述做法是可行的。
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大球球[使用道具]
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发表于 2013-5-5 20:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你测定葡聚糖含量时，做标曲用的什么物质？是如何定量的？
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美丽婷婷[使用道具]
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发表于 2013-5-5 20:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用大麦β-葡聚糖标准品，称0.010ggβ-葡聚糖 ,加少量的去离子水 , 70℃水浴助溶 ,冷却至室温后定容至 10 mL。冰箱贮存备用 ,使用前稀释 10倍配成 0.1 mg/mL 的溶液。用刚果红溶液与标准品溶液反应准
确称取 01020 g刚果红溶解于
0.1mol/L、 pH 8.0的磷酸缓冲液中 ,定容至 200mL。
即可
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双_视野[使用道具]
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发表于 2013-5-5 20:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
标曲的制作应该问题不大，标曲的吸光度范围是多少？是否你做的原料中葡聚糖含量本来就很低；或者pH=10(碱性) 80℃下，提取3h，葡聚糖发生了分解；用的淀粉酶纯度如何？如果含有高活性的葡聚糖酶，也会分解目标物。
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莫莫莫[使用道具]
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发表于 2013-5-5 20:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #5 双_视野 的帖子

我也做这个，淀粉酶的纯度会影响提取吗？我只是用来去淀粉，用碘液检测不变蓝为止。标准曲线的吸光范围我优化了一下，和文献差不多都是550左右，至于高活性的葡聚糖酶，我将在索氏提取器里乙醇回流灭酶了啊。我现在是将提取液去淀粉和去蛋白后醇稀后，测定物质干重，多糖的率最高可达到12%。哪么的话，是否可行？谢谢您
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千里之外[使用道具]
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发表于 2013-5-5 20:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 莫莫莫 的帖子

请问那个碘液怎么配啊，具体加入量，我不知道浓度呢
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grace![使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼主，你的葡聚糖标品是从哪买的 ？
我还想问一下，乙醇回流灭酶时，是像索氏抽提一样，把样品放在滤纸包里吗？那回流完样品怎么取出来？
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巅峰时刻#-#[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主，你好，我也在做β-葡聚糖的提取实验，用刚果红法测定含量，但不知为什么，不同条件下的提取物测得的吸光度竟然一样（20℃下反应30min后每个颜色都差不多，根本没差别），而且确实很低啊，很是郁闷啊。不知你是怎么解决的啊
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