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标题:[未解决]多酚氧化酶活性一高一低咋整？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
迷糊小鬼[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多酚氧化酶活性一高一低咋整？

多酚氧化酶活性一会高一会低的，这种情况应该要怎么办？
铜离子对多酚氧化酶的影响会怎么样？
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apple_danny[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是将底物先加到10ml离心管理，然后将酶液用枪加进去，然后盖上盖子，然后摇2-3下，到到比色皿立刻盖上，然后摁快捷键扫描，熟练的话5秒内怎么也做完这套动作了。我用的是岛津的UV-1800，还挺好用的。看了一下，吸光值是呈抛物线，酶的活力下降很快，你捣腾20秒估计酶活下降很多了。对了，熟练后尽量控制时间一致，反正是比相对活性。
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today@[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对于：一会高一会低的的情况，先控制好条件，温度啊，溶液浓度啊。底物的状态，浓度等。如果这些都没问题，我估计就是你的溶液不均匀，局部浓度大，局部小。至于铜离子吗。好像会是它失活，降低活性。时间久了，不太记得了。反正不会是增加活性的。
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未完~待续[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得应该是仪器有问题？试样未摇匀？
楼主换台仪器试试吧 祝好运！
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80年代的人[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你使用分光光度计测的吧，那你的手法很重要。当酶和底物混合后，反应即刻发生。由于计算活性是最开始反应的线性部分，而且随着反应酶活性下降很快，从混合后到你放到机器扫描过程中，几秒钟的差异将造成很大的差异，这可能是你活性变化的原因。我建议你将第五加到5ml离心管中，然后加入酶，盖上后迅速翻转混匀1-3下（每次要一样），然后打开到入比色皿，点击快捷键测定。这个需要练练，尽量每次时间误差小。我现在每次都极快，一般不超过3秒，因此每次时间应该差不多。
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发表于 2013-5-5 21:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #5 80年代的人 的帖子

你从加酶到测量只需要3秒，好厉害啊！我最近也在测酶活，数据不好，只有微小的变化，是不是测量前磨蹭的时间太久了（需要20秒），酶失活了？多长时间测量一次？
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#断点#[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 apple_danny 的帖子

我用的也是是岛津的UV-1800。你的吸光值大概到什么时候就开始下降了？
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疲惫黑眼圈[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看酶的浓度吧，如果用的是sigma的纯酶，我看了一下，20s之内还算斜率比较靠近直线，过了20s以后斜率下降得比较多了，到了40s-60s后基本上就快曲线水平了。但是如果是自己提的酶，可能活性下降速度就不一样。
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=心晴=[使用道具]
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发表于 2013-5-5 21:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是自己提的酶，我做了效应物对酶的抑制，加快速度放进去测定，吸光度没什么变化，不知道是什么原因？
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不化妆的lay[使用道具]
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发表于 2013-5-5 22:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我测酶活的时候（买的纯酶），不到一分钟就开始下降了，貌似中间没有水平曲线，是不是酶的浓度太大了，导致反应很迅速，酶一下子消耗完了？
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