小中大电泳过程
1. 将电泳槽准备好，胶板的矮面朝里，加入电泳液，先在里面和外面个加入一半的电泳液，排净气泡后加满。
2. 上样，上样量为8μl。上样时要慢，如果担心样的中央处有凹陷，那就在边处让样流下。
3. 按照“红对红，黑对黑”的原则安装电极。开始跑电泳。先恒压70v使蛋白质跑到同一条起跑线上，待跑至分离胶上时，改为100v，使溴酚蓝全部跑出时停止。电压越小跑的越好。
转膜过程
1.剪好滤纸和NC膜，滤纸要比膜小1~2cm，在转膜液中浸泡。
2.准备白色的矮一些的盒子，里面装好转膜液，将膜取下，取得过程中要注意不要将膜弄破。
3.制作“三明治”，夹板黑色的一面朝向桌子，第一层为海绵，第二层为滤纸，第三层为胶，第四层为滤纸，这时不要急于将最后一层海绵盖上，先将前面三层中的气泡赶走，然后再加入第五层海绵。夹紧，不要让夹板扭动。
4.放入“三明治”时要按照“黑对黑”的原则放入。在倒满转膜液之前不要忘记将一个冰盒放在转膜槽内。将转膜槽放在装满冰的盆里，开始转膜。我们需要的分子量范围是：>250kd~31kd，我们转膜的条件为恒压70v，2h。
封闭
1. 封闭液的配制（5%）：将10g脱脂奶粉加入到200mlPBS中，在漏斗中过滤。
2. 将膜取出，放在去离子水中冲洗一下，放入封闭液中。
3. 放在摇床上封闭2h。
一抗的孵育
1. 将膜从封闭液中取出，用PBS冲洗3次，每次10min。按照分子量将膜剪开。
2. 一抗有两种孵育方法：一、室温孵育：在桌面上铺一张纸，将剪好的膜放在纸上，加上相应的一抗。二、过夜孵育：准备夹链袋，将膜用镊子放入，但是不能碰到膜的表面，将抗体加入，不能有气泡。在室温下摇动1h（可以将枪按到一档）4℃过夜。
3. APP(1:200),Navβ2（1：200），Nav1.2(1:200),NR1(1:200),BACE1(1:1000),GAPDH(1:1000)
二抗的孵育
1. 将膜从夹链袋中取出,一抗回收放在PBST中冲洗3次，10min一次。
2. 二抗在暗室中进行，GAPDH二抗用800鼠（1：4000），其他用700兔（1：4000）。
3. 二抗孵育1h。
4. 洗膜：PBST冲洗3次，每次10min。最后再用PBS冲洗一次。扫膜。
