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标题:【求助】为什么我配制的RIPA蛋白裂解液...

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发表于 2013-5-7 18:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么我配制的RIPA蛋白裂解液...


为什么我配制的RIPA蛋白裂解液，裂解细胞后，很难离心得到上清？
一大团非常粘稠的，透明的DNA，非常难离心。不知道什么原因

我的RIPA的配方是

50mM Tris，
150mM NaCl，
1% Triton X-100，
1% sodium deoxycholate，
0.1% SDS
调PH值到7.5.
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发表于 2013-5-7 18:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该是裂解液的用量不够~你能否提供具体一点的信息？
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发表于 2013-5-7 18:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超声一下,以煎碎基因组
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发表于 2013-5-7 18:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家的回复。

RIPA 用量是足够的。我试过好几次，都是相同的问题。一大团非常粘稠的，透明的DNA，很难离心压缩下去，导致上清一点点。一吸，就吸出粘稠透明的DNA。

我可以试一试超声。

我以前用被人配制的RIPA，都没有这样的问题。

可能是我配制的问题。
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发表于 2013-5-7 18:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

粘稠的主要的释放出来的DNA， 可以冰浴用超声波打断DNA
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发表于 2013-5-7 18:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
粘稠的主要的释放出来的DNA， 可以冰浴用超声波打断DNA

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我也遇到同样的问题,请问具体方法,以及需要什么仪器
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发表于 2013-5-7 18:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
超声一下,以煎碎基因组

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请问具体方法,以及需要哪些仪器
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发表于 2013-5-7 18:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我遇到过同样地问题。我用碧云天强RIPA就会出现，而用中RIPA就没有。强RIPA裂解了细胞核，基因组DNA被释放。我超声过一次（15 S左右），可以打断DNA。但是后来有几次没有能完全打断，可能和超声时间有关。你可以延长超声的时间试试。
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发表于 2013-5-7 18:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我遇到过同样地问题。我用碧云天强RIPA就会出现，而用中RIPA就没有。强RIPA裂解了细胞核，基因组DNA被释放。我超声过一次（15 S左右），可以打断DNA。但是后来有几次没有能完全打断，可能和超声时间有关。你可以延长超声的时间试试。

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我也遇到这样的问题了，请问怎么用超声来解决，步骤能具体点么，谢谢
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发表于 2013-5-7 18:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
粘稠的主要的释放出来的DNA， 可以冰浴用超声波打断DNA

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具体操作步骤能说一下么，很感谢
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