蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】Surface plasmon resonance(SPR)

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】Surface plasmon resonance(SPR)

静夜思[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107978
精华 0
积分 150
帖子 60
信誉分 100
可用分 1036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
1

发表于 2013-5-8 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】Surface plasmon resonance(SPR)


我正在做SPR的相关实验，但是我不知道如何才能鉴别2个蛋白是真正结合了还是非特异性结合。有的老师说看RU就可以。但是我现在有2个蛋白，理论上不存在有结合，但是我得到了2700个RU，所以很困惑。
不知道有没有大仙能够帮忙解释下，谢谢！
顶部
mimili_901[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73543
精华 0
积分 564
帖子 723
信誉分 102
可用分 4458
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
2

发表于 2013-5-8 11:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是要做梯度验证的，而且最好能有两个对照蛋白（阳性和阴性）。有没有结合，看最后解离的指示线情况。直接做一个梯度给出2700Ru没有太大意义，因为看不出特异还是非特异，而且这种Ru还跟分子量相关。
顶部
静夜思[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107978
精华 0
积分 150
帖子 60
信誉分 100
可用分 1036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
3

发表于 2013-5-8 11:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2013-5-8 11:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这是要做梯度验证的，而且最好能有两个对照蛋白（阳性和阴性）。有没有结合，看最后解离的指示线情况。直接做一个梯度给出2700Ru没有太大意义，因为看不出特异还是非特异，而且这种Ru还跟分子量相关。 ...

请问如何看解离的指示线？
我这个蛋白结合上以后就不会解离，即便加入1M NaCl也不能解离。请问有何方法吗？
顶部
ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
4

发表于 2013-5-8 11:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不知道你这个不解离是不是做个梯度实验得出的？既然已经偶联好了芯片，做个梯度应该是很方便的事情。
梯度实验证明不解离的话应考虑两者是特异结合的了。
顶部
yueban-1147[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75776
精华 0
积分 692
帖子 1064
信誉分 100
可用分 6113
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-27
状态 离线
5

发表于 2013-5-8 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问如何看解离的指示线？
我这个蛋白结合上以后就不会解离，即便加入1M NaCl也不能解离。请问有何方法吗？

=======================================================================

一点儿都不解离？一般蛋白蛋白相互作用不会这么强啊，你确定你的蛋白没有biotinylated？
顶部
静夜思[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107978
精华 0
积分 150
帖子 60
信誉分 100
可用分 1036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
6

发表于 2013-5-8 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yueban-1147 于 2013-5-8 11:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请问如何看解离的指示线？
我这个蛋白结合上以后就不会解离，即便加入1M NaCl也不能解离。请问有何方法吗？

=======================================================================

一点儿都不解离？一般蛋白蛋白相互 ...

没有
顶部
mimili_901[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73543
精华 0
积分 564
帖子 723
信誉分 102
可用分 4458
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
7

发表于 2013-5-8 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果说一点都洗脱不下来（1M NaCl），这种现象有些奇怪。
也就是说你只要增加另一蛋白，那样Au值会不停增加，然后直到饱和？
顶部
yjf1026[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76421
精华 1
积分 497
帖子 670
信誉分 102
可用分 4116
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
8

发表于 2013-5-8 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2013-5-8 11:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

如果说一点都洗脱不下来（1M NaCl），这种现象有些奇怪。
也就是说你只要增加另一蛋白，那样Au值会不停增加，然后直到饱和？

是的，就是这样。不过我没试过饱和。试过1M NaCl洗脱过夜，仍然只能洗掉约200RU（结合有1700RU）
顶部
mimili_901[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73543
精华 0
积分 564
帖子 723
信誉分 102
可用分 4458
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
9

发表于 2013-5-8 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有做过偶联另一蛋白，然后用原偶联蛋白去流过吗？
顶部
静夜思[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107978
精华 0
积分 150
帖子 60
信誉分 100
可用分 1036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
10

发表于 2013-5-8 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2013-5-8 11:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
有做过偶联另一蛋白，然后用原偶联蛋白去流过吗？

没有试过，请问具体怎么操作？
我现在也无法肯定是不是有什么问题，有可能是我的蛋白带有GST 标签的原因。也可能真的有结合。
顶部