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标题:【求助】线粒体提取后如何提线粒体内的蛋白

嗅嗅[使用道具]
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发表于 2013-5-10 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】线粒体提取后如何提线粒体内的蛋白

请教各位大侠，线粒体提取后用什么较好的方法提取线粒体蛋白？能否指点下，谢谢
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-5-10 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在主要用20%TCA来提取线粒体蛋白质的，请问你提的线粒体的纯度怎么样啊，怎么检测的阿，可以共享马？gbj9999@163.com你是不是要做双向电泳阿？
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bs4665[使用道具]
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发表于 2013-5-10 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主，你是提什么的线粒体啊？我想提酵母的线粒体，你有好的方法介绍吗？
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daod[使用道具]
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发表于 2013-5-10 13:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好,我也是想提取细胞的线粒体蛋白,但是不知道在分离线粒体以后怎么提取蛋白啊!
能不能说详细一点啊!20%TCA是指的什么??????
我检测线粒体的纯度是用的南京建成的时机盒,他有检测的方法啊！
如果有关线粒体方面的大家可以讨论一下啊！
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发表于 2013-5-10 13:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意同意，是否可以建一个关于提取线粒体和线粒体蛋白(关于酵母的就更好啦：）)的QQ群啊，这样大家留言探讨就更方便了，是不是啊？！高手出来带个头吧，各位老师及有经验的师兄师姐们给我们指指路吧！谢谢啊
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junjie05[使用道具]
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发表于 2013-5-10 13:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用裂解液冰上裂解1h，离心12000g，10min即可
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memory[使用道具]
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发表于 2013-5-10 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能成吗？我是直接用2Xloading buffer裂了，跑PAGE，做WB，结果还在等待中，
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发表于 2013-5-10 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实最好的办法就是加表面活性剂 ，你可以试试用Triton X-100,SDS,或者D-十二烷基麦芽糖苷。因为你提取的细胞器内的蛋白，首先得把膜破碎，有要保证蛋白的生物活性，但是离子型表面活性剂对膜作用太强，所以选较温和的表面活性剂。
同时我将做从细胞膜中提取膜蛋白，查阅的文献了，选用了双水相体系对蛋白的提取是不错的选择。
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发表于 2013-5-10 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主，你是提什么的线粒体啊？我想提酵母的线粒体，你有好的方法介绍吗？

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文献里提到是必须加一个破壁酶Lyticase，对于酵母菌是比较特殊的~~~~sigma公司有卖的~~
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xyw5[使用道具]
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发表于 2013-5-10 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

线粒体总蛋白RIPA就可以，如果单纯是要线粒体上清的话低渗含镁缓冲液匀浆后超速离心1小时
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