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标题:【求助】western blot求救！！

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发表于 2013-5-10 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western blot求救！！


近期转膜出现问题，100v，1小时，丽春红染色出现不规则形状图形，已赶过气泡，上图，请高手指导！


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2013-5-10 13:57
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-5-10 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
根据marker推测、在转膜过程中、胶的各部分出现不同不规则的形变、受热过量的可能性比较大、
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发表于 2013-5-10 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，但是怎么解决呢，以前染色还好好的，近几次出现的问题，该怎么办？
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发表于 2013-5-10 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还是有气泡啊
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 小中大

应该不是气泡，我赶过气泡的，何况这么大，这么多，不可能看不到啊，连续两三次了，奇怪！
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发表于 2013-5-10 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有可能是你制的分离胶没有均匀的凝好导致
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发表于 2013-5-10 13:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
检查一下夹具，或者借一套别人的看看到底是试剂的问题还是夹具的问题
我估计是夹具或铂金丝的问题
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 小中大

考马斯亮蓝染色，胶上的条带很好，应该不是分离胶的问题。
检查夹具和转膜装置，未发现明显的问题，今天又换了一套转膜装置，100v1小时和200mA 2小时都试过了，结果依然不理想，立春红染色条带总是有些不规则的图案。
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发表于 2013-5-10 13:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

丽春红染色不均匀啊。我觉得是你前期浸泡的时候没泡好，或者说是转膜后没有立即用丽春红染色。
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发表于 2013-5-10 14:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

和大家汇报下，问题解决了，主要是夹子使用时间长，松了，多加了层滤纸并且加强降温后，转膜染色条带恢复正常了，谢谢大家！
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