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标题:[未解决]短肽的HPLC定量分析

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
pickmemory[使用道具]
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发表于 2009-12-14 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

短肽的HPLC定量分析

要检测样本内五肽(氨基酸序列已知，如GRGDS)的浓度，我看文献上是用6mol/L(也有用12mol/L)盐酸水解后，将五肽水解成单个的氨基酸，再用柱前衍生化法用HPLC检测各氨基酸的浓度。我现在的疑问是：1 标准曲线如何制作？是选择相应的氨基酸，各氨基酸使用相同的摩尔浓度测定再描绘的吗？
2 样本中的多肽浓度的结果如何给出，是用检测得到的单个氨基酸浓度吗？理论上五肽中各个氨基酸的摩尔浓度除了甘氨酸(GRGDS中两个G)外，应该都是相同的吧？
本人非药物分析专业，对HPLC一知半解，还请各位高手解惑，多谢!
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发表于 2009-12-14 19:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 pickmemory 的帖子

既然你检测的是单个氨基酸，那就应该用单个氨基酸来做各自的曲线。再从检测的结果中计算各自的含量

多肽的结果，可以根据你水解的反应，通过单个的结果再换算归去
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发表于 2009-12-14 20:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 thereyoube 的帖子

感谢您的回复!
至于“根据水解的反应，通过单个的结果再换算回去”，具体怎么换算？谢谢
我的样本是短肽，水解后的样本含有相应的单个氨基酸，能用另外购买的氨基酸来绘制标准曲线吗，另外，这数个氨基酸要分别绘制标准曲线吗？最后的结果能否合成到一张图里？
问的问题比较粗陋，见笑

[ 本帖最后由 pickmemory 于 2009-12-14 20:27 编辑 ]
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zxlyid[使用道具]
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发表于 2009-12-14 20:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一定要水解后才能衍生吗？
1、标准曲线用相同的已知含量的氨基酸配制系列不同的浓度制成，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立曲线方程。
2、把样品的峰面积代入曲线方程得出浓度。
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pickmemory[使用道具]
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发表于 2009-12-14 21:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢楼上的回复。
我的样本中有固态物质，需要用有机溶剂把它溶解。至于水解多肽，是参考文献中的做法。如果不水解短肽，不知道有机溶剂(如氯仿)，会不会影响短肽的定量测定呢？
还有，如果直接用短肽做标准曲线，可以吗？
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pickmemory[使用道具]
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发表于 2009-12-14 21:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
顺便再问个问题，衍生用的异硫氰酸苯酯(PITC)用哪个厂家的比较好？sigma的1ml200多，还要预订，要等一个月的时间
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发表于 2009-12-15 08:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
只要短肽与五肽之间有确定的定量关系能够换算就行，异硫氰酸苯酯(PITC)这个东西以有用过，忘了是什么品牌的了，你看一下国内的比较大 的试剂公司的就行，主要是要求纯度高点。
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pickmemory[使用道具]
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发表于 2009-12-15 09:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢zxlyid的回复。
我贴子里说的短肽，就是五肽。
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haohaorenjia[使用道具]
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发表于 2009-12-15 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我对多肽不太了解，线性绘制是对分析方法的研究，根据分析测定的物质应相应绘制线性曲线，一般线性为五点，中间点是平时分析进样浓度。
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notrjhn[使用道具]
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发表于 2009-12-15 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议楼主到分子探针上面看看cuturl('http://www.invitrogen.com/site/u') ... ontactUs/China.html
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