蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】怎么证明一个蛋白是激酶呢??

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】怎么证明一个蛋白是激酶呢??

冰儿0109[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73475
精华 0
积分 201
帖子 142
信誉分 100
可用分 1461
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
1
 

【求助】怎么证明一个蛋白是激酶呢??

现在在做一蛋白,老师猜想他可能是激酶,让我想办法证明。请各位战友提供证明蛋白是激酶的思路方法,谢谢啊
顶部
eric930[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79368
精华 0
积分 722
帖子 1061
信誉分 101
可用分 6148
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
2
 

现在主流的方法是SILAC
顶部
mimili_901[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73543
精华 0
积分 564
帖子 723
信誉分 102
可用分 4458
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
3
 

SILAC 主要是鉴定差异 表达蛋白的吧

LZ可以进行同源分析,或者进行domain分析看有什么结构域是属于酶的
顶部
冰儿0109[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73475
精华 0
积分 201
帖子 142
信誉分 100
可用分 1461
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
4
 


QUOTE:
原帖由 eric930 于 2013-5-11 10:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

现在主流的方法是SILAC

求详细描述
我看了一下,貌似用这个方法没法确定一个蛋白是激酶
谢谢
顶部
冰儿0109[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73475
精华 0
积分 201
帖子 142
信誉分 100
可用分 1461
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
5
 


QUOTE:
原帖由 mimili_901 于 2013-5-11 10:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

SILAC 主要是鉴定差异 表达蛋白的吧

LZ可以进行同源分析,或者进行domain分析看有什么结构域是属于酶的

我也看了SILAC这个方法,貌似不太可能用来鉴定激酶啊
之前的同源分析结果显示跟神经的一些蛋白同源性高,一个跨膜蛋白,可能是粘附分子
老师觉得也有可能是酪氨酸激酶
但是我没发现什么激酶的活性区域
不知道您有没有什么好的软件推荐
谢谢
顶部
finger[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 71816
精华 0
积分 574
帖子 787
信誉分 100
可用分 4799
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-31
状态 离线
6
 

试试这个
cuturl('http://www.ebi.ac.uk/Tools/pfa/iprscan/')
顶部
紫烟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74519
精华 0
积分 198
帖子 176
信誉分 100
可用分 1591
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
7
 

The use of MBP as a preferred substrate suggested that the
p48 SIP kinase might be a MAP kinase. Another hallmark of
MAP kinases is their activation via dual phosphorylation of
tyrosine and threonine residues by MAP kinase kinases
(Seger and Krebs, 1995). To determine whether the SIP kinase
was similarly activated, extracts from SA-treated cells
were subjected to immunoblot analysis, using the phosphotyrosine-
specific monoclonal antibody 4G1 O (Figure 3A).
lncreases in the amount of a phosphotyrosine-containing
48-kD polypeptide were associated with the SA-mediated
activation of the p48 SIP kinase. Furthermore, the transient
activation of the p48 kinase after SA treatment (Figure IA)
correlated with a transient increase in the level of a phosphotyrosine-
containing 48-kD protein (Figure 3A). These results
suggest that the p48 SIP kinase is a MAP kinase.

这是我看到的一篇文献上的节选,不知道是否对你有用
顶部
rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
8
 

用放射性p32 ATP为供体, 用磷酸酶处理过的细胞粗提液作为底物(也可以认为是激酶的底物库substrate library)。ra然后比较auto-phosphorylation和添加你的候选激酶后的放射性活性。 如果添加后选激酶的闪烁读数significantly高于细胞粗提液的读数, 可以初步判断你的候选激酶可能是蛋白激酶。

用酪氨酸,丝/苏氨酸随机多肽库(random peptide library)作底物也行。这种随几多肽是中间的氨基酸是磷酸位点,其左右的氨基酸是随几序列。 不过要采用更高浓度比例的p32 ATP。 一般的蛋白激酶火星测试是采用p32 ATP和ATP混合体,再比例上ATP的含量>>p32 ATP的含量。
顶部
冰儿0109[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73475
精华 0
积分 201
帖子 142
信誉分 100
可用分 1461
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
9
 


QUOTE:
原帖由 rxcc33 于 2013-5-11 10:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

用放射性p32 ATP为供体, 用磷酸酶处理过的细胞粗提液作为底物(也可以认为是激酶的底物库substrate library)。ra然后比较auto-phosphorylation和添加你的候选激酶后的放射性活性。 如果添加后选激酶的闪烁读数significa ...


顺便问句,我这个蛋白是膜蛋白,诱导出来都是包涵体,暂时还没纯化出天然蛋白,试问该怎么做呢?
还有一个,就是假如我把蛋白复性成功,然后使用您所说的方法。
假如我运气好,读数增加,我很幸运
但是假如读数不增加,是不是会有:1.我的蛋白不是激酶---这个我就可以放弃做这个蛋白是激酶这个思路 2.假如是我的蛋白是我复性过程中被我搞没的活性,那我该怎么拍出这个可能呢
顶部
紫烟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74519
精华 0
积分 198
帖子 176
信誉分 100
可用分 1591
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
10
 
找到了,Salicylic Acid Activates a 48-kD MAP Kinase in Tobacco。你看看,希望对你有帮助
顶部