小中大3. Western Blot实验条件
Western Blot实验条件我基本是按ABCAM公司经典教材做的,按以下的网址下载下来就可以了(cuturl('http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/WB-beginner.pdf'))。具体的试剂配方我是按宝生物试剂册的附录部分配制。丙烯酰胺和甲叉我是从北京华美买的德国biomol原装货,配出来的胶可以提在手里玩,弹性非常好,价格比sigma的便宜许多,1公斤好像是480多人民币,够实验室用好长时间,现在我们实验室做双向电泳都用biomol的胶,很好用。Marker我现在用fermantas 的SM1811,2微升就很清晰了,兰州的代理是上海生工。
要强调的是垂直电泳缓冲液千万不能回收用,具体愿因你只需上网查查SDS-PAGE的原理就知道了。转移电泳缓冲液可以回收再用两次。
转膜我通常是快转两百200毫安/2小时,慢转80毫安/12小时。快转是一定得做冰水浴,就是把槽子泡在冰水混合液里。
封闭我通常用BD的脱脂奶粉,不归,260元500克,也是从北京华美买的。
ECL我用pierce的,500毫升1650元,比国产的还便宜好用。
胶片是柯达的,以前用过乐凯的,不如柯达。
我很少用丽春红或考马斯染膜或染胶,总觉得是脱裤子***的事。