小中大1. 关于L-谷氨酰胺,所购Grace’s Insect Cell Culture Medium(powder)中是含有的,贮藏过程中及配成溶液后在-20度和接下来的4度存放到底有无分解就不清楚了,但昆虫细胞的生长状态良好,这方面的问题应该不大.
2.有一点我描述有误,虽然转染时我改用无FBS、无抗生素的Sf-900 II SFM,但转染后我又换回10%FBS的Grace’s Insect Cell Culture Medium,之后细胞没有出现病毒感染迹象,细胞不停在生长。
接下来我想对试验方案做以下改变:
1.用promega公司Wizard® PlusMiniprepsDNA Purification System多提取pBACmid用以转染,因为所需DNA量是专指pBACmid,DH10BAC中的质粒除pBACmid外还有helper plasmid,pBACmid只占一部分。
2.转染前一天接种细胞,但涉及到用何种培养基的问题,即接种后至转染这段时间是用不完全培养基还是完全培养基(转染前再用不完全培养基洗)。
3、转染时不用Sf-900 II SFM 而改用不完全Grace’s Insect Cell Culture Medium(不含FBS和抗生素,但含lactoalbumin 和yeastolate)。
不知以上考虑是否符合实际?