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标题:【求助】关于抗体分子量问题

queen[使用道具]
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【求助】关于抗体分子量问题

如果相同来源的同一个抗体,例如都是抗人CK19,同样是单抗或多抗,是否分子量越大,说明抗体纯度越低呢??
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shenkunjie[使用道具]
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原帖由 queen 于 2013-5-13 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
如果相同来源的同一个抗体,例如都是抗人CK19,同样是单抗或多抗,是否分子量越大,说明抗体纯度越低呢??

WB的分子量?分子量 好像和抗体纯度没有多大关系吧,有些抗体组分很单一的也可能会有交叉反应,因为抗体识别的表位可能会和其他蛋白交叉
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原帖由 shenkunjie 于 2013-5-13 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


WB的分子量?分子量 好像和抗体纯度没有多大关系吧,有些抗体组分很单一的也可能会有交叉反应,因为抗体识别的表位可能会和其他蛋白交叉

谢谢您的回复。那分子量与什么有关呢?为什么不同牌子的抗体分子量不一样呢??(同种属,同抗体)
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shenkunjie[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 queen 于 2013-5-13 15:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


谢谢您的回复。那分子量与什么有关呢?为什么不同牌子的抗体分子量不一样呢??(同种属,同抗体)

不同公司的抗体的表位不一样,分子量你可以参考文献或者理论分子量,一般翻译后修饰会分子量变化,如果同一个膜上面做出来不一样,那就比较麻烦,你可以具体把两个公司的抗体链接发上来看看
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queen[使用道具]
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不同公司的抗体的表位不一样,分子量你可以参考文献或者理论分子量,一般翻译后修饰会分子量变化,如果同一个膜上面做出来不一样,那就比较麻烦,你可以具体把两个公司的抗体链接发上来看看

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大概原因如下,是ABCAM总结的,但这么说的话,只知道predicted molecular weight实际条带位置会出现在哪里是无从得知的。。
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queen[使用道具]
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不同公司的抗体的表位不一样,分子量你可以参考文献或者理论分子量,一般翻译后修饰会分子量变化,如果同一个膜上面做出来不一样,那就比较麻烦,你可以具体把两个公司的抗体链接发上来看看

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图不能正常显示,复制一个:

Why is the actual band size different from the predicted?

Western blotting is a technique that separates proteins based on size - in general, the smaller the protein the faster it migrates through the gel. However, migration is also affected by other factors and so the actual band size observed may differ from that predicted. Common factors include...

post-translational modification - e.g. phosphorylation, glycosylation etc which increases the size of the protein
post-translation cleavage - e.g. many proteins are synthesized as pro-proteins, and then cleaved to give the active form, e.g. pro-caspases
splice variants - alternative splicing may create different sized proteins from the same gene
relative charge - the composition of amino acids (charged vs non-charged)
multimers - e.g. dimerisation of a protein. This is usually prevented in reducing conditions, although strong interactions can result in the appearance of higher bands
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不同公司的抗体的表位不一样,分子量你可以参考文献或者理论分子量,一般翻译后修饰会分子量变化,如果同一个膜上面做出来不一样,那就比较麻烦,你可以具体把两个公司的抗体链接发上来看看

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只有预测值时该如何得知条带位置,求高手指教!!(我的蛋白预测值是270KD)
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shenkunjie[使用道具]
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图不能正常显示,复制一个:

Why is the actual band size different from the predicted?

Western blotting is a technique that separates proteins based on size - in general, the smaller the protein the faster it migrates through the gel. However, migration is also affected by other factors and so the actual band size observed may differ from that predicted. Common factors include...

post-translational modification - e.g. phosphorylation, glycosylation etc which increases the size of the protein
post-translation cleavage - e.g. many proteins are synthesized as pro-proteins, and then cleaved to give the active form, e.g. pro-caspases
splice variants - alternative splicing may create different sized proteins from the same gene
relative charge - the composition of amino acids (charged vs non-charged)
multimers - e.g. dimerisation of a protein. This is usually prevented in reducing conditions, although strong interactions can result in the appearance of higher bands

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这个应该是abcam网站的吧?你把两个不同公司的产品链接发上来
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queen[使用道具]
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这个应该是abcam网站的吧?你把两个不同公司的产品链接发上来

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CST:

Specificity / Sensitivity

Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb detects endogenous levels of total Notch1 protein. It recognizes both the full-length (~300 kDa) and the transmembrane/intracellular region NTM (~120 kDa).

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Pro2438 of human Notch1.

来源:cuturl('http://www.cellsignal.com/products/3608.html')

博奥森:predicted molecular weight: 270kDa
来源:cuturl('http://www.bioss.com.cn/prolook_03.asp?id=1219')
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shenkunjie[使用道具]
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Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Pro2438 of human Notch1.

来源:cuturl('http://www.cellsignal.com/products/3608.html')

博奥森:predicted molecular weight: 270kDa
来源:cuturl('http://www.bioss.com.cn/prolook_03.asp?id=1219')

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NOTCH1 CST的应该是cleaved的,博奥森自己都不知道自己的抗体做出来是多少,只是给了个理论分子量。没有任何参考意义。
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