蛋白质与蛋白组学

试试提高一下你的lysis buffer中的imidazole的浓度，从10mmol/L试起，包括20mmol/L、甚至可以到30mmol/L。这样柱子的特异性会提高些，但是，你的目的蛋白可能要损失大一些。对了，目的蛋白与柱子结合的时候最好不要用过柱的形式，把含有目的蛋白的细胞裂解液与柱子颗粒一起放在小锥形瓶中，用摇床孵育1h左右，然后再装柱洗脱，这样可能会好一些。仅供参考！

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关于NI与目的蛋白结合的时间，我有些疑问：Protocol上讲Ni与HIS TAG的结合能力强与抗原抗体反应，我因为作流式较多，知道一般的抗原抗体反应30min就可以得到很好的效果。而Protocol也说反应15-60min。是不是反应的时间过长会造成非特异性结合？一般的反应有必要反应到60min吗？是不是20min就可以了，这样反而可以减少非特异性结合。