蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】MILIPORE的RIPA裂解液是不是都含有磷酸酶抑制剂？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 16  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】MILIPORE的RIPA裂解液是不是都含有磷酸酶抑制剂？

glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
1

发表于 2013-5-16 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】MILIPORE的RIPA裂解液是不是都含有磷酸酶抑制剂？


最近在做p-AKT1，实验室用的蛋白裂解液是MILIPORE的RIPA裂解液，用的时候我还加了PMSF，但是疑惑的是，它是否含有磷酸酶抑制剂？p-AKT1抗体用的是SANTA的，每次出来只有单一条带，刚开始以为就是目的条带，仔细比对MARKER后发现条带大概是在90KD的位置，而p-AKT1约60KD,不知道这怎么解释？
顶部
ROSE李[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76171
精华 0
积分 466
帖子 611
信誉分 100
可用分 3866
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
2

发表于 2013-5-16 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不会含有磷酸酶抑制剂的，因为这会增加产品成本。
cuturl('http://www.millipore.com/catalogue/item/20-188')
0.5M Tris-HCl, pH 7.4, 1.5M NaCl, 2.5% deoxycholic acid, 10% NP-40, 10mM EDTA.
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
3

发表于 2013-5-16 11:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ROSE李 于 2013-5-16 11:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

应该不会含有磷酸酶抑制剂的，因为这会增加产品成本。
cuturl('http://www.millipore.com/catalogue/item/20-188')
0.5M Tris-HCl, pH 7.4, 1.5M NaCl, 2.5% deoxycholic acid, 10% NP-40, 10mM EDTA. ...

那请问哪个公司的磷酸化酶抑制剂比较好用 ，谢谢
顶部
vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
4

发表于 2013-5-16 11:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般的裂解液都不会含有抑制剂的 抑制剂是在你使用的时候按照比例加进去
做抑制剂比较好的 除了版主推荐的pierce以外 Merck的也不错 我们实验室用的就是这个牌子的
cuturl('http://www.calbiochem.com/') 货号是524625 你可以看看
顶部
xyw5[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75137
精华 1
积分 620
帖子 815
信誉分 102
可用分 4991
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
5

发表于 2013-5-16 11:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上海生工的含均有蛋白酶抑制剂混合物 和磷酸酶抑制剂混合物 。 PL005， PL006， PL007 ， PL008
顶部
qhyu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77304
精华 0
积分 705
帖子 1049
信誉分 100
可用分 6111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
6

发表于 2013-5-16 11:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从你的描述看，抗体是没有问题的。我卖了很多 sc-101629 ，都没有投诉。
不知道你的 marker 是否和样品一起跑的？
跑胶的时候蛋白是多少KD?
样品是否含有标签蛋白、his标签？
建议查下样品本身是否因其他原因导致分子量变大。
顶部
nn255[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76746
精华 0
积分 652
帖子 1024
信誉分 100
可用分 5877
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
7

发表于 2013-5-16 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主，显色条带和marker不相一致的问题最后是怎么解决了？？
因为最近也有类似问题。虽然目标蛋白和楼主的不一样
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
8

发表于 2013-5-16 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 nn255 于 2013-5-16 11:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问楼主，显色条带和marker不相一致的问题最后是怎么解决了？？
因为最近也有类似问题。虽然目标蛋白和楼主的不一样

正在排除抗体的问题。。。
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
9

发表于 2013-5-16 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
从你的描述看，抗体是没有问题的。我卖了很多 sc-101629 ，都没有投诉。
不知道你的 marker 是否和样品一起跑的？
跑胶的时候蛋白是多少KD?
样品是否含有标签蛋白、his标签？
建议查下样品本身是否因其他原因导致分子量变大。

==========================================================================================================

你好 ，谢谢你啊，我们样品不含有标签，为干扰一个基因后，检测P-AKT1的变化，可以做出来，但是条带位置稍高一点，MARKER应该是没问题的，抗体应该也没事，以前曾经做过免疫组化的。那您分析还有可能是什么原因呢？Thanks
顶部
fei1226com[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79957
精华 0
积分 599
帖子 898
信誉分 100
可用分 5286
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
10

发表于 2013-5-16 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好 ，谢谢你啊，我们样品不含有标签，为干扰一个基因后，检测P-AKT1的变化，可以做出来，但是条带位置稍高一点，MARKER应该是没问题的，抗体应该也没事，以前曾经做过免疫组化的。那您分析还有可能是什么原因呢？Thanks

===========================================

我也要做P-AKT1呢，不知道您有没有什么经验传授。。。
顶部
 16  1/2 12››