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标题:【求助】JNK及P-JNK

luoliqiong[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】JNK及P-JNK


求教：最近要做JNK及P-JNK的western，他们分子量是一样的，是需要分开做还是可以曝光一个之后洗膜之后再曝光另一个？
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lgm[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我感觉分开做好些，洗膜经常洗不干净
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ququer787[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
洗膜效果都不好
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问你做出来了没？我也在做这两个蛋白。。。
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主做出来了吗，总水平和磷酸化的抗体可以在同一个位点上吗？
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发表于 2013-5-16 18:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

通常 蛋白磷酸化修饰之后，wb显示相对分子质量是不会有明显的变化，会在同一个位子上，至于你要检测总的和磷酸化的，建议还是做两张膜，毕竟stripping过后还是会洗掉一部分蛋白的，还有也有可能洗不干净
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以先做磷酸化的，然后不洗膜，直接敷总的的一抗，看总蛋白的表达情况
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am10[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意楼上的，先做磷酸化的，再做total的。不行一次做两块胶，一起跑更方便的
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢了，我计划先杂磷酸化，在杂总的，但是杂完磷酸化之后还是需要洗膜的吧，这点小弟不是很明白。请多指教。
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orangecake[使用道具]
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发表于 2013-5-16 18:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多谢了，我计划先杂磷酸化，在杂总的，但是杂完磷酸化之后还是需要洗膜的吧，这点小弟不是很明白。请多指教。

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需要stripping的，因为总蛋白抗体和你的磷酸化抗体结合的位点可能会不一样，如果不stripping，应该会有叠加效应
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