蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】谁做过Hif1a的WB，能在120KD做出来吗？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 53  1/6 123456››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】谁做过Hif1a的WB，能在120KD做出来吗？

zhihui小新[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108883
精华 0
积分 276
帖子 252
信誉分 100
可用分 1968
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
1

发表于 2013-5-17 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】谁做过Hif1a的WB，能在120KD做出来吗？


Hif1a的WB好象特别难做，我试了几次，组织中的核蛋白的Hif1a怎么也在120KD测不出来，谁做过Hif1a的WB啊，能做出来吗
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
2

发表于 2013-5-17 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zhihui小新 于 2013-5-17 13:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

Hif1a的WB好象特别难做，我试了几次，组织中的核蛋白的Hif1a怎么也在120KD测不出来，谁做过Hif1a的WB啊，能做出来吗

可以做
顶部
cwcwcww[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 101434
精华 1
积分 311
帖子 277
信誉分 102
可用分 2191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2012-12-3
状态 离线
3

发表于 2013-5-17 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能做，我们用的是novus的抗体，非常好。

因为HIF-1a很容易降解，所以提蛋白的时候要注意。
顶部
zhihui小新[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108883
精华 0
积分 276
帖子 252
信誉分 100
可用分 1968
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
4

发表于 2013-5-17 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 cwcwcww 于 2013-5-17 13:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

能做，我们用的是novus的抗体，非常好。

因为HIF-1a很容易降解，所以提蛋白的时候要注意。

确实是这样，请问怎么避免HIF-1a 的降解呐
顶部
cwcwcww[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 101434
精华 1
积分 311
帖子 277
信誉分 102
可用分 2191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2012-12-3
状态 离线
5

发表于 2013-5-17 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一个是速度要快，一个是尽量低温

我们做的是细胞，你好像是用的组织

这就不太清楚了

我们组里以前有做过小鼠的HIF-1，但不是取的核蛋白，提的是总蛋白

好像做出来的效果还可以

你们用的是哪家的抗体呢

我们组一直做的是低氧，HIF-1也摸索了很久

现在基本都可以做出来

你可以换抗体试试，我觉得一抗很重要
顶部
zhihui小新[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108883
精华 0
积分 276
帖子 252
信誉分 100
可用分 1968
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
6

发表于 2013-5-17 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 cwcwcww 于 2013-5-17 13:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
一个是速度要快，一个是尽量低温

我们做的是细胞，你好像是用的组织

这就不太清楚了

我们组里以前有做过小鼠的HIF-1，但不是取的核蛋白，提的是总蛋白

好像做出来的效果还可以

你们用的是哪家的抗体呢

我们组一直做的 ...

我做的确实是组织中的，而且是提取的核蛋白，一直做不出来，不知你们谁有好的建议吗
顶部
静夜思[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107978
精华 0
积分 150
帖子 60
信誉分 100
可用分 1036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
7

发表于 2013-5-17 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也和楼主一样很困惑，我用的是santa cruze的兔抗鼠多抗，1：100，HIF1a做不出来，提得是小鼠组织的总蛋白，是否真是一抗的问题还是实验技术问题？请高人指点！
顶部
静夜思[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107978
精华 0
积分 150
帖子 60
信誉分 100
可用分 1036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
8

发表于 2013-5-17 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一个是速度要快，一个是尽量低温

我们做的是细胞，你好像是用的组织

这就不太清楚了

我们组里以前有做过小鼠的HIF-1，但不是取的核蛋白，提的是总蛋白

好像做出来的效果还可以

你们用的是哪家的抗体呢

我们组一直做的是低氧，HIF-1也摸索了很久

现在基本都可以做出来

你可以换抗体试试，我觉得一抗很重要

================================================================================================

请问你们做小鼠组织的HIF-1是在120KDa附近跑出来的吗？我的WB结果在100KDa附近有条带，不知是不是HIF-1的条带？十分感谢！
顶部
jingling845[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103462
精华 0
积分 330
帖子 380
信誉分 100
可用分 2671
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
9

发表于 2013-5-17 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能做，我们用的是novus的抗体，非常好。

因为HIF-1a很容易降解，所以提蛋白的时候要注意。

=============================================================

我正准备买NOVUS的HIF-1α抗体，你用的是核蛋白吗? 我看说明 推荐用核蛋白
顶部
jingling845[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103462
精华 0
积分 330
帖子 380
信誉分 100
可用分 2671
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
10

发表于 2013-5-17 13:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能做，我们用的是novus的抗体，非常好。

因为HIF-1a很容易降解，所以提蛋白的时候要注意。

===========================================================

我正准备买NOVUS的HIF-1α抗体，你用的是核蛋白吗? 我看说明 推荐用核蛋白
顶部
 53  1/6 123456››