蛋白质与蛋白组学

不好意思，我又思考了下。

我能不能这样：组织先加裂解液和蛋白酶抑制剂匀浆，把匀浆分出一半来立即加磷酸酶抑制剂，再稍匀下。这样前面那部分匀浆可以检测PP2A，后面加了磷酸酶抑制剂的可以检测磷酸化。

有经验的战友们，快点帮帮我啊！我后天就要取组织了，急！！！

灰常感谢咯！

==============================================================================

当然不好，你最开始裂解的时候如果没有磷酸酶抑制剂，则磷酸化蛋白早就去磷酸了。再后续加有何意义？

最简单的方法就是直接裂解的时候把所有的抑制剂都加上，加了磷酸酶抑制剂也不会影响检测PP2A

不牵扯磷酸化，通常只需蛋白酶抑制剂。
若要保持目的蛋白的磷酸化状态，要加磷酸酶抑制剂，因其会将目的蛋白去磷酸化。
若要保持目的蛋白的去磷酸化状态，据我所知，EDTA可抑制磷酸化。
所以，如果是PP2A的话，不需额外加磷酸酶抑制剂，因其本身为磷酸酶，并非底物。
另外，裂解液成分很重要，你的实验应该避免使用含SDS和脱氧胆酸钠的裂解液。

==============================================

想问一下，为什么提取磷酸化蛋白的裂解液不能含有SDS呢？

如果是检测PP2A，我觉得没必要，但要检测别的磷酸化蛋白，如PP2A的底物等，还是要加抑制剂的。

磷酸酶和蛋白激酶的抑制剂都是细胞裂解液中比较常规的试剂，主要有焦磷酸纳、钒酸钠、氟化钠、甘油二磷酸等，具体哪些是磷酸酶的抑制剂，哪些是蛋白激酶的抑制剂我忘了，如果楼主不知道使用浓度，请回帖，我可以帮忙继续给你贴出来~~

=========================================================================================================

你好，我做的是磷酸化的AMPK蛋白，磷酸化位点在苏氨酸172位点，我需要买什么样的磷酸化酶抑制剂啊？谢谢，对于磷酸化抑制剂我不太了解。