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标题:【求助】用Trizol提蛋白注意什么

大海啊故乡[使用道具]
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发表于 2013-5-18 10:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】用Trizol提蛋白注意什么

我了解的周围的实验室都是用裂解液提取蛋白质。
我想用Trizol同时提RNA和蛋白质。已经试着提过一次了，发现蛋白质超级难容，50度水浴好不容易溶解了，冷却之后又有很多沉淀出来。我用的是1%SDS溶的。

有做过这方面的吗？给点意见，嘿嘿
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-5-18 10:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也想用Trizol同时提RNA和蛋白质，但是很多人说提出的蛋白不能跑wb，但是我看过一篇文献说这个方法提出的蛋白是可以跑的 请高手指教
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发表于 2013-5-18 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也想用Trizol同时提RNA和蛋白质，但是很多人说提出的蛋白不能跑wb，但是我看过一篇文献说这个方法提出的蛋白是可以跑的 请高手指教
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okhaha[使用道具]
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发表于 2013-5-18 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
明天准备这样提的 怎么都说不能溶呢。。。
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popo520[使用道具]
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发表于 2013-5-18 10:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以尝试使用 冷丙酮沉淀试试！
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发表于 2013-5-18 10:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
冷丙酮?有试过的吗？
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发表于 2013-5-18 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不见有人回答，我也这样提过，确实不容易溶解，我５０度水浴过夜，最终还是有很多沉淀，而且蛋白浓度低，无法做ＷＢ。
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2013-5-18 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们是50°溶解过，蛋白不会全部溶解，但是加了loading 变性后就基本都溶解了。我们实验室就这么做，跑western 也挺好的，不知道你现在做出来没有
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小荷尖尖[使用道具]
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发表于 2013-5-18 10:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们是50°溶解过，蛋白不会全部溶解，但是加了loading 变性后就基本都溶解了。我们实验室就这么做，跑western 也挺好的，不知道你现在做出来没有

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是说在沉淀中加loading吗？
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-5-18 10:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你说的加loading是loading buffer吗?我用trizol法提的蛋白也超级难溶，最后我用超声破碎仪也溶解不了，请指教啊
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