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标题:【求助】关于硫酸铵沉淀

u76mp[使用道具]
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【求助】关于硫酸铵沉淀

各位大哥:
用硫酸铵沉淀,比如从30%,50%,70%,90%,分别沉淀出的蛋白质有什么区别,是根据分子量吗,还是根据什么,不同浓度沉淀的蛋白质有什么区别。还有就是,最终剩下的上清夜中没有蛋白质吗,那么里面有什么
谢谢
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u76mp[使用道具]
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不是根据分子量来沉淀的!硫酸铵分级沉淀主要是根据蛋白质在不同盐浓度的溶解性。到90%以上浓度的硫酸铵,上清里面还会有蛋白,这些蛋白在高盐下也有很大的溶解性!
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u76mp[使用道具]
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蛋白质在高盐浓度下容易发生集聚,所以就产生沉淀现象!
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junjie05[使用道具]
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正常情况下,由于蛋白质氨基酸残基的侧链具有亲水性的基团如氨基、羧基、羟基等,在水溶液中能够吸附水分子,使蛋白质分子周围形成水化膜,从而使蛋白质能够以胶体的形式在溶液中稳定存在。当加入中性盐时,大量的中性盐能够使蛋白质脱去水化膜,导致蛋白质分子聚集而产生沉淀现象。蛋白质在溶液中能够稳定存在还依靠其表面电荷。如果溶液的pH值等于其等电点,也会导致蛋白质分子聚集而发生沉淀。
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junjie05[使用道具]
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不同浓度的中性盐使其水化膜去除的程度不同,导致蛋白质的疏水性基团暴露程度也不同,因而可使不同的蛋白质发生沉淀现象。
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bs4665[使用道具]
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我有个问题,就是如何得知你要的目的蛋白在哪个溶解度下沉淀出来呢?还是各个分段都收集然后跑电泳,谢谢。
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applebook=213[使用道具]
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基本上可以参考别人的资料

另外,不同种类的蛋白在不同的溶解度中会沉淀下来
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bamboo16[使用道具]
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可以先作个梯度,分别用20% 40% 60% 80%的硫酸铵沉淀,分析你要的蛋白在什么梯度下沉下来,最好先用低一点的浓度把杂蛋白沉淀下来,再沉淀你的目的蛋白,注意:并不是硫酸铵浓度越高越能沉淀完全
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u76mp[使用道具]
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谢谢大家,那么我还有一个问题就是:梯度沉淀后最后剩下得上清液中还剩些什么,还有蛋白质吗,谢谢
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veiwu[使用道具]
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关于硫酸铵沉淀的一点建议:
1.硫酸铵沉淀机理为:蛋白质在溶液里面溶解度和盐浓度有关系。在低盐浓度下,如果增加盐浓度,会增强蛋白质的溶解,这是因为,盐的离子与蛋白质表面的正负电荷配对,减少了蛋白质电荷表面相互作用的机会。当盐浓度高到一定程度的时候,过多的盐会跟蛋白质疏水表面争夺水分子,以至于蛋白质疏水表面倾向于相互作用形成聚合物沉淀下来。
2.把目的蛋白沉淀下来的最佳浓度,完全是靠经验的,而且实验的每次也不一定重复,因为能否沉淀蛋白和自己本身的浓度液有关系。
3.有一个很简单的方法可以用来估计蛋白质沉淀所需硫酸铵的浓度。把样品分成五份,每份分别加硫酸铵至20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 离心去掉沉淀,保留上清,再向上清里面添加硫酸铵使浓度从20%到30%, 30%到40%, 40%到50%, 50%到60%, 60%到70%,离心保留沉淀,然后分析沉淀里的蛋白, 就能找到目的蛋白在哪里了!
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