小中大关于硫酸铵沉淀的一点建议:
1.硫酸铵沉淀机理为:蛋白质在溶液里面溶解度和盐浓度有关系。在低盐浓度下,如果增加盐浓度,会增强蛋白质的溶解,这是因为,盐的离子与蛋白质表面的正负电荷配对,减少了蛋白质电荷表面相互作用的机会。当盐浓度高到一定程度的时候,过多的盐会跟蛋白质疏水表面争夺水分子,以至于蛋白质疏水表面倾向于相互作用形成聚合物沉淀下来。
2.把目的蛋白沉淀下来的最佳浓度,完全是靠经验的,而且实验的每次也不一定重复,因为能否沉淀蛋白和自己本身的浓度液有关系。
3.有一个很简单的方法可以用来估计蛋白质沉淀所需硫酸铵的浓度。把样品分成五份,每份分别加硫酸铵至20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 离心去掉沉淀,保留上清,再向上清里面添加硫酸铵使浓度从20%到30%, 30%到40%, 40%到50%, 50%到60%, 60%到70%,离心保留沉淀,然后分析沉淀里的蛋白, 就能找到目的蛋白在哪里了!