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标题:【求助】蛋白复性形成二聚体

vtongli[使用道具]
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发表于 2013-5-21 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白复性形成二聚体


蛋白复性一直形成二聚体，8M urea 1% 2-ME 溶解，3M urea过夜稀释。3M urea-2M-1M透析复性。每次都是2M时候一点单体都没了
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发表于 2013-5-21 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，你怎么知道没有单体了呢
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-5-21 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个蛋白本身就是二聚体的话不是很正常么
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发表于 2013-5-21 13:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 DONT 于 2013-5-21 13:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请问，你怎么知道没有单体了呢

我跑的非还原胶
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vtongli[使用道具]
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 小中大


QUOTE:
原帖由 rxcc33 于 2013-5-21 13:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这个蛋白本身就是二聚体的话不是很正常么

我用的是原核表达系统，按理来说，不太可能是多体。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-5-21 13:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很多蛋白的天然四级结构就是多聚体啊，比如血红蛋白，LDH之类的。
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发表于 2013-5-21 13:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 rxcc33 于 2013-5-21 13:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
很多蛋白的天然四级结构就是多聚体啊，比如血红蛋白，LDH之类的。

我的是植物的β-tubulin，目前很多动物的tubulin是在体外做单体聚合的，基本都是能得到单体的，不过他们都是可溶性表达。
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发表于 2013-5-21 13:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我跑的非还原胶

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你好，请问你是怎么跑的非变性胶呢？胶是如何配的？上样缓冲液？还有就是需要注意哪些事项？麻烦分享一下经验，因为我按照蛋白质手册拍非变性胶一次也没有成功过，谢谢了！
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发表于 2013-5-21 13:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非变性胶，就是缓冲液中不加SDS，B-ME，DTT之类的东西
跑出的非变性通常都不好看，而且跑的时间长，你最好低温条件下
你复性的缓冲液还要变化一下
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vtongli[使用道具]
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 小中大
你好，请问你是怎么跑的非变性胶呢？胶是如何配的？上样缓冲液？还有就是需要注意哪些事项？麻烦分享一下经验，因为我按照蛋白质手册拍非变性胶一次也没有成功过，谢谢了！

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就是loading buffer里面没有还原剂（β-ME和DTT）
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