蛋白质与蛋白组学

你用的AP是否是新鲜配置，即使不是，也得放在四度冰箱里保存。另外，TEMED的量少了，建议上10微升。如果凝的速度慢，也可放入37度恒温箱里。在拔梳子之前，先左右晃动，看看梳齿之间的胶凝了没有。祝好。

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最近在做WB，已有资料表明，分离胶一般30-60min，浓缩胶15-30min即可凝固，可我灌的胶（10％分离胶，AP用量为0.05ml，TEMED为0.002ml；5％浓缩胶，AP用量为0.02ml，TEMED为0.002ml）一般都需2h以上才凝固的比较好。
昨天灌胶，浓缩胶经2h后仍不能完全凝固，表现为插梳子的部分呈液体。
请问该如何解决呢？

如果你的胶是小板体系，也就是大约4ml分离胶，1ml浓缩胶，那么2ulTEMED也已经足够了，我估计最可能问题出在10％的AP是不够新鲜已经过期的。建议
1：重新配置10％AP。平时分管保存在—20度，我得经验是3个月仍旧有效
2：如果用新鲜10％AP没有解决问题，那么就要怀疑AP固体是否有问题，然后是TEMED（观察是否变黄，如变黄，则失效可能性很大）
3：使用新的AP和TEMED不能排除问题，则考虑配置的30％丙烯酰胺是否有误，浓度是否正确。新手可能是30g混合物加上100ml水配置的，那样，终浓度下降，凝固时间大大延长。
4：仍旧解决不了问题，只有怀疑药品失效。
关于温度，即使放到冰箱里，2个小时也可以凝固了，不会是你问题所在。

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最近在做WB，已有资料表明，分离胶一般30-60min，浓缩胶15-30min即可凝固，可我灌的胶（10％分离胶，AP用量为0.05ml，TEMED为0.002ml；5％浓缩胶，AP用量为0.02ml，TEMED为0.002ml）一般都需2h以上才凝固的比较好。
昨天灌胶，浓缩胶经2h后仍不能完全凝固，表现为插梳子的部分呈液体。
请问该如何解决呢？