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*2D样本处理小结
这张图的主要目的是让大家比较一下样本处理对2D实验结果是多么的重要。以下的3张图是来自于第3龄的果蝇幼虫的蛋白抽提物的三种不同的处理方式所得到的2D图谱。 胶的上样量是基于同样数量的样本， 而不是基于同样的蛋白量。第一向IEF使用的是pH 3-10 线性胶条，水化液为8 M urea, 2% CHAPS, 0.5% IPG buffer, 65 mM DTT
左图展现的是幼虫匀浆以后直接加入 8 M urea, 4% CHAPS以及PMSF作为蛋白酶抑制剂来裂解。 这是一个比较标准的样本制备过程， 但是从图上可以看出， 2D的结果并不好， 背景太深， 蛋白质点的分布和分离的情况也不好。
中图展现的是将幼虫匀浆以后使用2%的SDS裂解， 并且随后在95°下加热3分钟处理得到的图谱。 虽然有SDS的存在， 但是2D的展现很好， 点分离清楚， 并且在垂直的分子量水平上和水平的等电点上都得到了很好的展现。
右图展现的是将所提取的蛋白用TCA和丙酮沉淀以后再在尿素和CHAPS中重悬， 这个同样是一个我们常常使用的技术手段。 蛋白质点的分辨率很好， 但是总的蛋白质量却比较低， 这个造成的原因可能是沉淀后的蛋白没有能够很好的完全溶解所造成的， 这个情况在2D CLEAN UP KIT的使用过程中也常常出现。
