蛋白质与蛋白组学

非常非常谢谢两位，我的步骤大致是，我先用beads与总蛋白4摄氏度，摇一个小时，然后离心，取上清，加入gp91的抗体，4摄氏度摇4个小时，然后再加入beads，4摄氏度摇1个小时，然后离心，去上清，将离心的东西TENE缓冲液洗5遍并且离心，最后在离心物中加入2倍的SDS-PAGE buffer,然后用这个离心物去做Western，但是什么都没有，我不知道怎么回事，高手们解决解决困难那，我都快不行了。

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你实验步骤应该没问题，先用beads预吸附，再加抗体做IP。你的总蛋白是怎么做的？抗体大约加多少？用什么方法显色？做IP-western应该能看到IgG重链的条带，如果啥都没有你得先考虑Western系统是否出问题，二抗很容易出问题的。再强调一次，你抗体首先在总蛋白上要先能够做出Western条带。