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标题:【求助】丽春红染色出事了。。

idoww[使用道具]
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发表于 2013-5-28 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】丽春红染色出事了。。

看见关于丽春红染色的原理和试验，感觉很好玩，就把自己转好并且曝光过的PVDF膜染色了，结果什么也没看见，没有条带出现，整个膜都红了。
我做的过程是：丽春红溶于5ml冰醋酸然后稀释到100mldd水中定容，配置成10倍母液。现配现用的按照1比9的比例稀释到水中使用，结果就出现了上述结果。。分析不出看是什么原因。首先蛋白的确有啊，其次配方在网上找的，人家信心十足的说可以，我这是怎么了做不出来呢。。。
另外发现TBST洗涤效果比PBS好

希望有人指点，感激不尽啊
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2013-5-28 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在下用的是这个配方感觉效果还可以：
10X丽春红染液：
丽春红S—————2g
三氯乙酸 ————30g
磺基水杨酸———30g
蒸馏水至 ————100ml
使用时将其稀释10倍。
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abc816[使用道具]
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发表于 2013-5-28 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用多少克丽春红呢？可能使比例有问题吧
我前几天也是丽春红洗不掉，用的是NCM。我换了配方：0.1克丽春红+5毫升冰乙酸，ddH2O定容到100ml，直接用就可以了，效果老好了！你可以试一下
不用准备储备液，用得不多，而且可以反复用，配一次就可以染好久！
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hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2013-5-28 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看见关于丽春红染色的原理和试验，感觉很好玩，就把自己转好并且曝光过的PVDF膜染色了，结果什么也没看见，没有条带出现，整个膜都红了。

是红了后洗不掉？一般是不会一下全洗白的，越洗越淡。
没有看到条带也很正常，因为wb的灵敏度比它要高几个数量级。

我做的过程是：丽春红溶于5ml冰醋酸然后稀释到100mldd水中定容，配置成10倍母液。现配现用的按照1比9的比例稀释到水中使用，结果就出现了上述结果。。分析不出看是什么原因。首先蛋白的确有啊，其次配方在网上找的，人家信心十足的说可以，我这是怎么了做不出来呢。。。
另外发现TBST洗涤效果比PBS好

希望有人指点，感激不尽啊

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总之，丽春红用来检测转膜效果还是不错的。
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发表于 2013-5-28 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的哪个公司的丽春红啊？sigma的效果很好。
曝光能看到条带说明蛋白在膜上了，丽春红看不见很可能是蛋白量少而已
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发表于 2013-5-28 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
记得听师兄讲过，PVDF膜不能用立春红染，只有NC膜才可以。
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发表于 2013-5-28 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“曝光过的PVDF膜”，就是说你之前已经封闭过了，所以在用立春红染色当然条带看不出来了，要转膜后就染色。
我今天下午刚做了，稍染一下条带就出来了，我用的是NC膜，PVDF膜不知道能不能染。
丽春红配制如下：0.1% (w/v) Ponceau S 溶于 5%冰醋酸，（10×的储存液）。
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idoww[使用道具]
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发表于 2013-5-28 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家，我昨天用我曝光过的NC膜染上了，一样的溶液，配方就是和lishufang821虫的一样。然后又用别人的PVDF染了一下，结果没有条带看见，发现也没染上。。。因此我推测PVDF不能染。可能是膜上带的电荷或者其他条件和立春红排斥。这个结论正确么？因为我前面的PVDF曝光很好。。。
还有就是大家点样的时候是怎么减少边缘效应的？可不可以在胶孔两端空着，最后加上与点样量相当的上样缓冲液？因为我飞发现跑完胶曝光时最边上的带总是有点弯。。
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发表于 2013-5-28 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

pvdf膜不能用立春红染
可以用考马斯亮蓝染：和ｐａｇｅ一样的配方，染５ｍｉｎ，脱色到条带清楚，大约１０ｍｉｎ
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idoww[使用道具]
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发表于 2013-5-28 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能具体说说么？是什么原因导致不能染？
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