小中大无论怎么复杂，本质无非两种情况，一是抗原有问题，二是抗体有问题。
对于抗原：
1、转膜时问题；
2、蛋白被降解
3、样品处理过程中蛋白丢失
4、样品中量很少，所用的抗体无法达到足够的检测灵敏度
5、样品处理液的问题，抑制了抗体活性，或者竞争性结合了抗体
验证办法： 取一株细胞，裂解后用你的同样WB条件，包括一抗和二抗去validate抗原的存在与否。如果用细胞的裂解液能够做出完美的结果，那么就是抗原的问题了。可以从以上4个方面去分析，包括重新杀小鼠取肝脏。
抗体问题：
1、抗体储藏时间过长，已经失去了活性
2、抗体质量很差，特异性很低
3、 一抗稀释度和不合适
4、 二抗的稀释度
5、 封闭液的可能问题
你所说的“换用了 别人使用过的 能作出来的 actin内参以及相应的二抗”， 我猜测是用你自己的抗原，用别人的一抗和二抗，也没有做出来。 你这种做法，还是没有办法排除故障。
鉴于beta-actin是个常见的WB内参蛋白，我个人认为很有可能是样品的处理问题。
可参考此文： cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2742551/')
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谢谢你的解答！！但是我的 目的条带都有 GAPDH 也有 ，很难解释 个别样本 actin却 没有 而且杂带很多
