小中大我们一般都是用DAB或者TMB进行显色,
DAB法的优点是简单、经济、灵敏度高、特异性好,缺点是现用现配、结果不能用久保存,需要拍照保存,而且试剂有毒;
TMB的特点是信噪比高,成分安全,特别适合于灵敏度要求高的WB,但是,由于其高灵敏度,常常引起高背景,不过可以通过延长封闭时间以及注意洗涤次数来一定程度的避免高背景。
但是由于现在国外的杂志不认可DAB和TMB显色结果,所以如果要想发国外的杂志,就得需要ECL显色,ECL方法虽然过程比较繁琐,但是一般的实验室都可以进行操作,ECL方法的关键是要有一个符合条件的暗室,如果有条件可以用CCD成像系统扫面结果的话就方便多了,
因此我的经验是,
如果是发国内的文章或者是摸条件的话,用DAB或者TMB显色就行,但是要注意DAB的致癌作用,要注意做好自我保护
如果要想在国外杂志发文章,用ECL显影,同时也要注意重金属Ag对人体的伤害,当然,如果有条件的话利用CCD成像系统对结果进行扫描的话,过程就显得简单得多了
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我们实验室一直用的是TMB,感觉灵敏度挺高的。操作简单,用着还算顺手。据说无毒,但没有深究。信噪比高?感觉尚可。但是显色时间要控制好,不然显久了容易发虚。
实验室用TMB显色的WB已经发了好几篇文章,没有因为不是ECL显色而文章被拒,我想可能是部分杂志要求ECL吧!这方面请更多人发表意见~
实验室有毒的东西已经够多。如果文章不是一定需要ECL,我想我还是喜欢无毒型的显色剂,含重金属的还是有些怕怕!