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标题:【求助】多肽的高效液相

冰岛老叟[使用道具]
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发表于 2013-5-31 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】多肽的高效液相


水溶性很好的多肽，过制备高效液相色谱，用乙腈和水做梯度流动相，让其分离，但效果不好，从峰型来看其在前几分钟是水相，峰分不开，要如何分开这些峰呢？
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uaubc[使用道具]
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发表于 2013-5-31 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

主要是看图，还有就是梯度是多少，用的是C18的柱子还是C4的柱子，不知道能否看看序列，水溶性很好的话最大问题就是出峰时间太早，你是制备还是分析都不一样的解决方法的
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发表于 2013-5-31 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以加一些缓冲盐，让其尽量的在多肽的等电点范围内，这样的话多肽不电离可能会在柱子上保留时间长一点，或者是选择亲水一点的柱子来走，保留时间也会长，关键还是要看你的序列和图，不然实在不好判断
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发表于 2013-5-31 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们里面有磷酸缓冲盐，用的是c18的柱子半制备液相，序列没有测 不是要纯的菜能测吗？
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发表于 2013-5-31 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 uaubc 于 2013-5-31 11:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
可以加一些缓冲盐，让其尽量的在多肽的等电点范围内，这样的话多肽不电离可能会在柱子上保留时间长一点，或者是选择亲水一点的柱子来走，保留时间也会长，关键还是要看你的序列和图，不然实在不好判断 ...

您好 我的样品本身就经过纯化，其中是含有盐的，不是如果是含盐的不纯的样品不能测序列吗？高效液相的图 就是在前面水洗的部分 有三四个大峰混在一起分不开。
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发表于 2013-5-31 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多肽的液相起始条件一般是TFA和乙腈，如果这个进行梯度优化还是峰分不开，再考虑加缓冲液调pH值
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发表于 2013-5-31 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 cocacola 于 2013-5-31 11:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

多肽的液相起始条件一般是TFA和乙腈，如果这个进行梯度优化还是峰分不开，再考虑加缓冲液调pH值

缓冲液不是加三氟乙酸吗？调节ph会不会将多肽的性质改变？
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发表于 2013-5-31 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 冰岛老叟 于 2013-5-31 11:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


缓冲液不是加三氟乙酸吗？调节ph会不会将多肽的性质改变？

不是一定要用TFA来做流动相的，可以使用甲酸，醋酸铵都可以的，很多的多肽纯化方法的，TFA只不过是特别特别通常的用法而已，我说的序列的意思是你的多肽有多少个氨基酸残基，一级结构是什么，包含什么氨基酸多一点，这都跟纯化有关系的
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发表于 2013-5-31 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 uaubc 于 2013-5-31 11:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


不是一定要用TFA来做流动相的，可以使用甲酸，醋酸铵都可以的，很多的多肽纯化方法的，TFA只不过是特别特别通常的用法而已，我说的序列的意思是你的多肽有多少个氨基酸残基，一级结构是什么，包含什么氨基酸多一点，这都跟纯化有关 ...

那我现在要如何来选择流动相呢？另外现在是未知多肽，不知道结构 就是要制备得出纯品才能去测出结构。
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uaubc[使用道具]
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发表于 2013-5-31 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多肽的首选液相起始条件一般是TFA和乙腈，这个是业界共识，一般如果这个条件解决不了，就需要根据多肽的pI以及疏水性考虑更换含有缓冲液的流动相，磷酸缓冲液，醋酸缓冲液等，另多肽的纯化也可以考虑离子交换的，而且一般离子交换的载量比反相要大
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