蛋白质与蛋白组学

是，我处理的细胞应该总的p38没有变化（就是跟actin一样，各个条带均匀一直），而磷酸化的p-p38是有变化的，结果出来的根预想的一样顺利，我已经完成了。

你的意思是把上样的胶转膜用actin孵育后压片没压出条带吧？
我想如果你看的actin的位置正确而没有条带的话，那么它就是上样前的sample的问题。western步骤繁多，找出问题所在真是件不容易的事。

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你好，非常感谢你！想再问下：你做的时候actin,p38,p-p38三种抗体（你是用哪家公司的抗体？）都得做吗，还是只做p38和p-p38？你做的时候三种抗体分开做的吗？膜有重新使用，换做其他抗体吗？p38和p-p38分子量是38KD吧？呵呵，问题太多，麻烦你了，因为这实验我做了好久了，结果都不好。

p38,p-p38是cell signaling的rabbit抗体；二抗也要用cell signaling的；
actin是sigma的mouse抗体；

我是三样都做了，因为事先我不知道p38会不会有变化，所以用actin来做loading control；

我是把p38和pp38分开做，然后两个膜stripping后做的actin。
p38和pp38分子量都不是38，而是43，跟actin一样，所以需要stripping。
关于stripping的方法你可以在园子里搜一下，会出来很多，或者，我刚给别人答复过，你搜一下我的ID。

祝早日做出好结果！

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谢谢你！
我看文献p38（有几种不同形式如：α，β，γ）分子量在38-43KD，而且我重新利用膜TBST１０×３次（抗体应该没洗脱掉），结果用两条带，感觉Ｐ３８是在ａｃｔｉｎ下面。不知道通常细胞中Ｐ３８主要是以那种形式存在？

oh, 我没注意p38有这么多种，我没对其深入了解。
我会把我用过的抗体data sheet附上，至于看哪一个p38就取决于你的研究目的。
下面是我做出来的条带，我的p38没出来过杂条带或两条，且就在43的位置出现的，我在43上下把membrane剪成大约1cm宽窄。

[ 本帖最后由 966735obeng 于 2013-5-31 17:32 编辑 ]