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标题:【求助】Elisa测全血某蛋白方法

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2013-6-1 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】Elisa测全血某蛋白方法


本人初学者，请教各位高人：Elisa可以测全血（血浆血清血细胞混合）的蛋白吗？如果可以的话，全血怎样处理？如果不可以有什么简便快捷的方法测全血的某种蛋白啊？请赐教，非常感谢
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-6-1 09:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Elisa可以测血浆或者血清的蛋白，但是如何做血细胞的蛋白！ 细胞提出蛋白来才能做！
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windy+++[使用道具]
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发表于 2013-6-1 09:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

血 细胞内的应该测不到吧。如果非要测，那就抗凝，然后用低渗液稀释，使血细胞破碎，蛋白释放出来，然后离心去掉细胞碎片，就可以测了。
可是，为啥要测全血的呢，呵呵，一般都是血浆或者血清里的，毕竟血细胞里的检测意义不大，甚至会干扰你的结果。
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发表于 2013-6-1 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 windy+++ 于 2013-6-1 09:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

血 细胞内的应该测不到吧。如果非要测，那就抗凝，然后用低渗液稀释，使血细胞破碎，蛋白释放出来，然后离心去掉细胞碎片，就可以测了。
可是，为啥要测全血的呢，呵呵，一般都是血浆或者血清里的，毕竟血细胞里的检测意义不大，甚至会干 ...

谢谢您的回复。我现在做的蛋白不知道到底分布在血浆，血清，还是血细胞，所以初步设想是不是有办法确定血液里有，然后再细分。
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abc816[使用道具]
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发表于 2013-6-1 09:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实你可以先尝试着用抗凝管收集做一下，如果是预实验，那么只要实验组和对照组没问题，结果应该会有差异。然后在尝试着取血，静置30min后4000rpm离心20min取上清，或者是像大鹏鸟给的方法破碎细胞。当然如果定位到某个细胞的话，最好就用细胞分离试剂盒分离后再破碎。
不过，有的elisa试剂盒是可以测血浆的，也建议你先测血浆或者血清，然后查查文献，定位于某种细胞，在分离细胞测Elisa
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2013-6-1 09:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问细胞里有的蛋白一定会在血浆或者血清中表达吗？
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2013-6-1 09:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 shenkunjie 于 2013-6-1 09:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请问细胞里有的蛋白一定会在血浆或者血清中表达吗？

蛋白有细胞内蛋白和分泌蛋白两种，因为全血对Elisa试剂盒有干扰，这大家都知道。所以我建议就是站友你可以先分析一下是分泌蛋白还是细胞内蛋白。或者是两者都有可能，然后就再分两种情况做实验。根据你的说明，只知道你是做全血的，也不知道你到底做的蛋白是分泌蛋白或者是细胞内蛋白，所以我建议先做下血浆或血清的预实验，看是否分泌，毕竟这比较简单。然后再分离细胞，做细胞内的elisa.

其实我的意思就是站友您最好看看能否查到文献，说明你测的蛋白是什么类型的蛋白。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2013-6-1 09:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 taoshengyijiu 于 2013-6-1 09:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


蛋白有细胞内蛋白和分泌蛋白两种，因为全血对Elisa试剂盒有干扰，这大家都知道。所以我建议就是站友你可以先分析一下是分泌蛋白还是细胞内蛋白。或者是两者都有可能，然后就再分两种情况做实验。根据你的说明，只知道你是 ...

我这蛋白是细胞浆内蛋白，至于是否分泌还没有报道。所以，你说的有道理，还是要先做一下再说。谢谢。
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shenkunjie[使用道具]
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 小中大
蛋白有细胞内蛋白和分泌蛋白两种，因为全血对Elisa试剂盒有干扰，这大家都知道。所以我建议就是站友你可以先分析一下是分泌蛋白还是细胞内蛋白。或者是两者都有可能，然后就再分两种情况做实验。根据你的说明，只知道你是做全血的，也不知道你到底做的蛋白是分泌蛋白或者是细胞内蛋白，所以我建议先做下血浆或血清的预实验，看是否分泌，毕竟这比较简单。然后再分离细胞，做细胞内的elisa.

其实我的意思就是站友您最好看看能否查到文献，说明你测的蛋白是什么类型的蛋白。

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很有可能不是分泌蛋白，那怎么测血细胞里的蛋白呢？
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am10[使用道具]
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发表于 2013-6-1 09:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很有可能不是分泌蛋白，那怎么测血细胞里的蛋白呢？

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最好先focus一种或几种你认为最可能表达的细胞，这要看看文献，加上你的前期实验结果综合分析。然后想办法分离。比如有许多白细胞分离试剂盒什么的。然后再去裂解细胞，做elisa。一般来说，全血中的细胞都有试剂盒可以分离。我觉得这样更可行一些
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